微生物技术 微生物技术 细胞生产中的原辅料控制.pptVIP

无机物：水，碳酸氢钠 有机物：乙醇，甲醛，L-谷氨酰胺，青霉素，链霉素 生物材料：合成培养基，胰酶，牛血清 包装材料： 细胞培养瓶（克氏瓶，转瓶），培养皿，多孔培养板 刻度吸管，玻璃瓶，离心管，冻存管 丁基橡胶瓶塞，硅胶瓶塞 其他 细胞生长条件 细胞培养基基本要求 水 基本营养物质：糖，氨基酸，维生素 促进生长因子，激素 基本元素、微量元素、促细胞贴附物质 温度 气体环境和pH 湿度和光 氨基酸 维生素、无机离子与微量元素 碳水化合物 无机离子 促生长因子及激素 渗透压 pH 无毒、无污染 体外培养细胞对水的质量非常敏感 。内毒素、有机污染物甚至电解质均可显著影响细胞质量。 三蒸水、超纯水才能作为细胞培养用水 培养用水不宜放置过久 尽量减少水与外界的接触 需对纯化水系统、管道进行定期监测、清洗、维护 外观、水分、内毒素、溶解性、pH值、冰点渗透压、菌落总数、细胞生长试验、稳定性、一致性 配制前检查 干粉颜色正常，粉末细度须均匀，无异味 配制后检查 溶解性 完全溶解 PH为7.0-7.5。 颜色为粉红色，澄清透明。 检样放置37℃厌氧和需氧条件下均72小时以上，应无浑浊和霉菌生长现象。 配制首要原则 充分溶解每一种成分 配制用水及调pH试剂用水均需新近制备 配制用器皿均需清洗烤干 采用15~30度的水配制 培养液配制过程中不需加热助溶 控制调节pH值用酸、碱加入量，保证培养基渗透压 无菌检验 保存日期 双刃剑 提供生长调节因子，促贴附物质，载体蛋白，蛋白酶抑制剂 良好的缓冲系统 补体、免疫球蛋白、生长抑制因子 属动物源性原料，有外源病毒等污染风险 外观：淡黄色，澄清透明，无溶血无杂质 蛋白质含量测定 无细菌、真菌、支原体、病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素 不含对所生产疫苗病毒的抑制物 支持细胞增殖检查 pH值 7.0～8.0 渗透压 240～340 mOsm/Kg H2O 观察血清融化后的颜色和清亮度，颜色偏红或色浅、有沉淀者不能使用 血清冻融后的最上层无色透明，活力最差，使用前摇匀 长时间冻存的血清融化后出现的沉淀物能抑制细胞生长，应弃去沉淀物 避免反复冻融 生产中尽量使用同一批号血清 细胞消化液的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。细胞生产用的消化液是胰蛋白酶和乙二胺四乙酸二钠（EDTA.2Na） 胰酶 性状：黄白色粉末，极易潮解，微臭，但无霉败的臭气 酪蛋白转化力测定 1：125或1：250 胰酶极易潮解，需储存在冷暗干燥处 低温配制 不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。 胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关。 在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。 Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性 胰酶消化过度造成细胞损伤 细胞培养瓶 规格尺寸、耐水性、耐热急变、抗热震性检查 培养瓶洁净度 瓶塞 酸碱度、紫外吸光度、还原物质检验 不挥发物、重金属、热原质、急性毒性、溶血检验 新细胞培养瓶使用前应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸溶液(5%)浸泡过夜。 培养后的细胞培养瓶清除培养基后立即浸入自来水中，注意让水能完全进入瓶皿中，不应有气泡。 刷洗：浸泡后的细胞培养瓶要用毛刷沾洗涤剂洗涤，以除去器皿表面的附着较牢的杂质。洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。 已掉毛的毛刷不可使用，以免出现玻璃划痕，残留洗涤剂而改变培养液酸碱度和毒害细胞 浸酸：刷洗不掉的极微量杂质经过硫酸和重铬酸清洁液浸泡剂的强氧化作用，可被除掉。清洁液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成，浸泡时，器皿要充满清洁液，勿留气泡。浸泡时间应达6小时以上。 冲洗：刷洗和浸酸后都必须用自来水充分冲洗，每瓶都得用水灌满，倒掉，重复五次，然后用纯化水重复冲洗三次，转入精洗灭菌工序。 漂洗 先用蒸馏水充分冲洗，使之不留任何残迹，每瓶都得用蒸馏水灌满，倒掉，重复三次以上，再用超纯水漂洗3次，晾干备用。 及时包装消毒，防止落入灰尘引起二次污染。 灭菌 按《热风循环烘箱操作规程》操作，180℃干烤4小时。 橡胶塞 新购置的橡胶塞在2%的NaOH溶液内煮15分钟，用饮用水冲洗后再用4%的盐酸溶液煮15分钟。 用饮用水和纯化水分别冲洗3－5遍后再浸泡在纯化水中一天以上。 精洗灭菌：捞出后，用超纯水冲洗2－3遍后，凉干包装， 121℃灭菌40分钟。 用过的胶塞，先经渡槽消毒液浸泡消毒后，随后以沸水煮半小时，再用刷子刷净。饮用水冲洗数3－5遍后，用纯化水冲洗一遍，并在纯化水中浸泡数小时。 精洗灭菌：捞出后，用超纯水冲洗2－3遍后，凉干包装， 121℃灭菌40分钟。