AnnexinV-FITCPI凋亡检测试剂盒..docxVIP

Annexin V-FITC PI 凋亡检测试剂盒 本试剂盒仅供研究使用 产品编号： A0001a 产品说明 在正常细胞中， 磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧， 细胞发生凋亡早期， 膜 磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。 Ann exin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨 酸有高度亲和力， 故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。 因此 Ann exin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸 外翻的发生早于细胞核的变化，而此阶段 Propidium Iodide （ PI ）不能通过细胞膜。细胞 坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加， PI 等核酸染 料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以 Annexin V-FITC（ 绿色荧光 ）常与 鉴定细胞死活的核酸染料（如 PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。 此试剂盒可用 于流式细胞仪和组织切片染色。 试剂盒组成 试剂 数量 TOC \o 1-5 \h \z Annexi V-FITC 100ul 10 x Binding Buffer 1ml PI 200ul 操作步骤 贴壁细胞需用0.25%胰酶消化或用2%EDTA勺PBS处理。注意，过度消化可能引起细胞损伤。在消化时用 2%EDTA可防止细胞过度消化。用 EDTA处理时，注意要彻底清除 EDTA在 标记前用1 x PBS或 1 x Binding Buffer洗涤，消除EDTA以免残余的 EDTA和 Ca2+螯合, 影响 Annexi V 的结合。 悬浮细胞直接进行以下操作： 1． 细胞收集：在室温下，以 300 x g 离心 5-10 分钟，收集细胞。 2． 细胞洗涤：用预冷 1 x PBS （4° C） 50ul 重悬细胞一次， 300 x g 离心 5-10 分钟， 洗涤细胞。 3． 标记前准备：用灭菌去离子水稀释 10 x Binding Buffer 至 1 x Binding Buffer ，按 4．每个标本 400ul 4． 每个标本 400ul 的 1 x 标记液配制：每份标本（ Binding Buffer 105-10 6 细胞） 的量配制，置于冰上备用。 配制 Annexi V 标记液 100ul 10x Binding Buffer annexin V-FITC10ul5ul 10x Binding Buffer annexin V-FITC 10ul 5ul distilled water 5. 用标记液轻轻重悬细胞， 85ul 56 105-106细胞 /100ul 孵育液，在暗处，室温下孵育 15分钟，再在 每份标本中加入 10ulPI 。 6．每 100ul 6．每 100ul 孵育液中加入冷的 400ul1 x Binding Buffer 稀释， 15分钟内进行流式检测。 试剂盒保存 存于 4° C。