抗体抗原反应缓冲液.docVIP

抗原抗体反应的原理 原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)与抗体超变区的沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。个人对于更倾向于诱导结合 抗原抗体的结合力 静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。 范登华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结合，这种引力的能量小于静电引力。 氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范登华引力强。 疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体结合作用最大。 抗原抗体的亲合性和亲合力 亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数 K 来表示：K=K1/K2 ，K值越大，亲合性越高；亲合性越高，与抗原结合越牢。抗体的亲合力是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关，即所谓多价优势，如 IgG 为两价，亲合力为单价的 103 倍， IgM 为 5～ 10 价，亲合力为单价的 107 倍。由于抗原抗体的结合应是可逆的，若抗体的亲合力高，与抗原分子结合牢固，不易解离；反之即容易解离。 亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，它们溶解在水中皆为胶体溶液，不会发生自然沉淀。这种亲水胶体的形成机制是因蛋白质含有大量的氨基和羧基残基，在溶液中这些残基带有电荷，由于静电作用，在蛋白质分子周围出现了带相反电荷的电子云并形成了水化层，由于电荷的相斥，就避免了蛋白质分子间靠拢、凝集和沉淀。当抗原抗体结合后，使水化层表面电荷减少或消失，水化层变薄，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。再加入电解质，如 NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。 影响抗原抗体反应的因素 自身因素 抗原 抗原的理化性状、表面抗原决定簇的种类和数目等均可影响抗原抗体 抗体 抗体对抗原抗体反应的影响主要有以下三个方面： 来源：不同动物来源的免疫血清，其反应性存在差异。 浓度：抗体的浓度是相对于抗原而言的，二者浓度合适时才易出现可见的反应结果 特异性与亲合力：特异性与亲合力是影响抗原抗体反应的关键因素，它们共同影响试验结果的准确度。试验试剂应尽可能选择高特异性、高亲合力的抗体，以保证试验的可靠性。 环境条件 电解质 抗原与抗体发生结合后，由亲水胶体变为疏水胶体的过程中须有电解质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷，水化层破坏，复合物相互靠拢聚集，形成大块的凝集或沉淀。若无电解质参加，则不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用 O.85 ％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液。但电解质的浓度不宜过高，否则会出现盐析现象。 酸碱度 蛋白质具有两性电离性质，因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体反应必须在合适的 pH 环境中进行， pH 过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质。抗原抗体反应一般在 pH 为 6～ 9 进行。 温度 抗原抗体反应必须在合适的温度中进行，一般以15～40℃为宜，最适反应温度为37℃。某些特殊的抗原抗体反应，对温度有一些特殊的要求，例如冷凝集素在 4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。此外，适当振荡和搅拌也能促进抗原抗体分子的接触，加速反应，其作用与反应物粒子大小成正比 结论：pH影响抗体抗原的表面电荷，如果pH过高或过低都会使抗原和抗体空间结构发生改变从而影响特异性结合，使最为重要的条件。在pH合适条件下，抗原抗体特异性初步结合，疏水作用力起最大作用力，若要进一步强化疏水作用力，必须在电解质作用下，使蛋白质表面失去电荷，从而破坏水化层，使蛋白质的亲水性胶体转变成疏水性胶体，这个过程抗体抗原结合更紧密，氢键和范德华力增加结合更加紧密。温度低抗体抗原结合速度慢，结合量多，反之速度快，结合量少。 抗原和抗体空间结构改变，失活P 抗原和抗体空间结构改变，失活 PH过高过低 电解质破坏水化层由亲水胶体转变成疏水胶体，结合更加紧密结构适合，抗原抗体依靠疏水作用力特异性快速初步结合 电解质破坏水化层由亲水胶体转变成疏水胶体，结合更加紧密 结构适合，抗原抗体依靠疏水作用力特异性快速初步结合 氢键和范德华力增加结合更加紧密 氢键和范德华力增加结合更加紧密 蛋白质变性 引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。 物理因素可以是加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照