抗酸染色操作.docVIP

北京中医药大学东直门医院 细菌室sop 文件编号:JYK-XJS-SOP- 生效日期: 年 月 日 责任部门:检验科 页 码:第 页 共 页 抗酸染色操作程序 【检验原理】 抗酸染色可将细菌分为两大类，即抗酸性细菌和非抗酸性细菌，因日常大多数病原菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检测项目，只针对结核病等具有抗酸性细菌标本的染色。 【主要组成成分】 1.石碳酸复红溶液 2.脱色剂（3%盐酸酒精溶液） 3.复染液（吕氏美兰溶液） 【样本要求】 1.直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率； 2.直接用细菌染色，要注意防护，以防生物感染。 【检验方法】 涂片经火焰固定，加1液徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5分钟（若染色奴卡氏菌需要更长时间），水洗。 加第2液不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗； 加3液，染0.5-1分钟，水洗。 干后油镜镜检。 【结果判断】 分支杆菌在暗背景中呈红色，背景为蓝色。 镜检结果分级报告 抗酸杆菌阴性（-）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌 抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌菌数）：1~8条/300视野 抗酸杆菌阳性（1+）：3~9条/100视野，连续观察300个视野 抗酸杆菌阳性（2+）：1~9条/10视野，连续观察100个视野 抗酸杆菌阳性（3+）：1~9条/每视野 抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条/每视野 【注意事项】 严格掌握脱色时间，要脱色充分，脱色时间过短易使红色的石炭酸复红染料残留显红色而造成假阳性。 在染片过程中，加1液后一定要酒精灯徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾，这样才能使细菌充分着色。 石碳酸对皮肤、粘膜有强烈的刺激性和腐蚀性，使用时要注意安全，如果不慎沾到皮肤上，立即用水或酒精冲洗。 涂片染色阳性只能说明抗酸杆菌的存在，不能区分是结核菌还是非结核分支杆菌。