维生素C的定量测定—2,6-二氯酚靛酚滴定法.docxVIP

. 维生素 C 的定量测定 — 2， 6-二氯酚靛酚滴定法 实验目的 学习定量维生素 C 的原理和方法 掌握微量滴定技术 实验原理 维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一， 缺乏时会产生坏血病， 因此， 又称为抗坏血酸。 它对物质代谢的调节具有重要的作用， 近年来发现它还能增强 机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。 维生素 C 是具有 L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。 它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量 都很丰富。 维生素 C 具有很强的还原性， 在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时， 维生 素 C 易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素 C 能将染料 2，6—二氯 酚靛酚还原成无色的还原型的 2， 6— 二氯酚靛酚，同时将维生素 C 氧化成脱氢 维生素 C。氧化型的 2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。当用 2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，在维生素 C 尚未全被氧化时，滴下的 2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶液中的维生素 C 刚好全部被氧化时，滴下的 2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红 色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素 C 刚好全部被氧 化，此时即为滴定终点，从滴定时 2， 6— 二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算 出被检物质中还原型维生素 C 的含量。 其化学反应式如下： C HO C HO C C HO C H  Cl O N O- o （兰色） o OH- Cl H + C Cl Cl O C HO N OH o O N OH o O C H Cl H C Cl 还原型 2， 6- 二氯酚靛酚（无色） HO CH 2，6- 二氯酚靛酚（红色） CH2OH CH OH 脱氢抗坏血酸 2 抗坏血酸 仪器、试剂 （一）仪器：研钵、天平、容量瓶（ 100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（ 50ml）、微量滴定管、漏斗 （二）材料、试剂 . . 1、新鲜蔬菜或新鲜水果 2、 1%草酸溶液 1g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中 3、 2%草酸溶液 2g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中 4、标准维生素 C 溶液 准确称取 20mg 纯维生素 C 粉状结晶于 1%草酸溶液中，稀释至 100ml，再取其中 10ml 稀释至 100ml，即得 0.02mg/ml 的维生素 C 溶液。在使用前临时配制。 5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液 溶解 50mg2，6— 二氯酚靛酚于约 200ml 含有 52mg 的 NaHCO3 的热水中， 冷后稀释至 250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用维生素 C 标准液标定其浓度。 实验步骤 （一） 2，6—二氯酚靛酚溶液的标定： 5ml 维生素 C 标准液及 5ml1%草酸溶液于 50ml 的锥形瓶中，用配制好的 2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持 15s 不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于 0.1mg 维生素 C，由此可求出每 ml2 ， 6—二氯酚靛酚溶液相当于维生素 C 的 mg 数。 （二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不 可食部分，切碎，混匀）约 10 克，于研钵中，加入等体积的 2%草酸溶液研磨成 浆状，得匀浆液。将匀浆液移入 100ml 容量瓶中，可用 1%草酸溶液帮助转移， 加入 30%Zn（AC ） 2 和 15%K 4 （ CN ）6 溶液各 5ml ，脱色，然后用 的草酸 Fe 1% 稀释至刻度，充分摇匀 ，静止几分钟后过滤。（弃去最初流出的几毫升溶液） （三）用移液管吸取滤液 5 或 10ml 于 50ml 的锥形瓶中，立即用标定过的 2， 6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色 15s 不褪色为止。记录所用染 料的 ml 数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过 2min。（此步骤平 行作 2—3 次） （一） 计算 维生素 C 含量（ mg/100g 样品） =（VT/W ）× 100 式中： V 为滴定样品所耗用的染料的平均 ml 数 T 为 1ml 染料相当于维生素 C 的 mg 数 W 为滴定时所用样品稀释液中含样品的 g 数 注意事项 1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素 C 被氧化。滴定过程一般不超 2min。滴定所用的染料不应少于 1ml 或多于 4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释； 2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢； 3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与 2， 6— 二氯酚靛酚反应，但反应速度均较维生素 C 慢，因而，滴定开始时，