微生物培养技术PPT幻灯片.ppt

* C、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 ℃下维持 15-30min. B、干热灭菌： 160-170 ℃下加热1-2h。 * （三）接种技术（课本第2页） 1.定义 2.平板培养基上接种方法 平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法 平板划线的操作方法 连续划线法 交叉划线法 * * 稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 * * * 1、微生物实验室培养的基本操作程序 （1）器具的灭菌 （2）培养基的配制 （3）培养基的灭菌 （4）倒平板 （5）微生物接种 （6）恒温箱中培养 （7）菌种的保存 （四）案例：大肠杆菌的分离和纯培养 * （1）制备牛肉膏蛋白胨培养基 2、大肠杆菌的分离和纯培养步骤 * （2)配制培养基：计算称量；熔化； 调PH；分装； 灭菌； 倒平板 （3）接种：平板划线法；稀释涂布平板法。 （4）培养： 倒置，37℃恒温箱，12和24h。 （5）纯化培养：倒置，37℃恒温箱，24h。 （6）菌种保藏：临时、长期保存法。 * 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 -20 ℃冷冻箱保存 * 二、培养基对微生物的选择作用 * （一）、基础知识 1、纤维素与纤维素酶 【案例】分解纤维素的微生物的分离 纤维素是一种多糖 纤维素酶是一种复合酶 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 * （二）、筛选 1、方法： 刚果红染色法 原理：刚果红（CR）可以与纤维素形成红 色复合物，当纤维素被纤维素酶分 解后，红色复合物无法形成，出现 以纤维素分解菌为中心的透明圈， 我们可以通过是否产生透明圈来筛 选纤维素分解菌。 * 常用的刚果红染色法有两种 方法一：在长出菌落的培养基上，覆盖1mg/mL的CR 溶液，10—15min后，倒去CR溶液，加入 1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液。 方法二：配制质量浓度为10mg/mL的CR溶液，灭菌 后，按照每200mL培养基加入1mL的比例加入 CR溶液，混匀后倒平板。 一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红 * （1）土壤取样 （2）选择培养（可省略） （3）梯度稀释 （4）涂布培养 （5）挑选产生透明圈的菌落 （6）微生物培养（纯培养） （三）、实验流程 * 三、测定微生物的数量 * （一）测定微生物数量的方法 1.直接计数法 最常用：显微镜直接计数法 （方法、优点、缺点、适用条件） 一、基础知识 * 2、间接计数法： 最常用的是稀释平板计数法 稀释平板法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 * （一）测定饮用水中大肠杆菌的数目 配制ＥＭＢ培养基 倒平板 接种（滤膜法） 培养 观察记录 二、实践案例 * 1、土壤取样 （二）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 2、配制培养基 尿素琼脂培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 * * 3、样品稀释 细菌：一般选用104 、105 、106倍的稀释液进行培养 放线菌：一般选用103 、104 、105倍的稀释液 真菌：一般选用102 、103 、104倍的稀释液 4、取样及平板接种（涂布平板或混合平板） * 在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂， 指示剂变红，就可以准确的鉴定该种细菌能够分解尿素。 5、培养与观察： 细菌：30～370C的温度下培养1～2d； 放线菌：25～280C的温度下培养5～7d； 霉菌：25～280C的温度下培养3～4d。 * 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同