微生物培养技术PPT幻灯片.ppt

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* C、高压蒸汽灭菌: 100kPa、121 ℃下维持 15-30min. B、干热灭菌: 160-170 ℃下加热1-2h。 * (三)接种技术(课本第2页) 1.定义 2.平板培养基上接种方法 平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法 平板划线的操作方法 连续划线法 交叉划线法 * * 稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。 * * * 1、微生物实验室培养的基本操作程序 (1)器具的灭菌 (2)培养基的配制 (3)培养基的灭菌 (4)倒平板 (5)微生物接种 (6)恒温箱中培养 (7)菌种的保存 (四)案例:大肠杆菌的分离和纯培养 * (1)制备牛肉膏蛋白胨培养基 2、大肠杆菌的分离和纯培养步骤 * (2)配制培养基:计算称量;熔化; 调PH;分装; 灭菌; 倒平板 (3)接种:平板划线法;稀释涂布平板法。 (4)培养: 倒置,37℃恒温箱,12和24h。 (5)纯化培养:倒置,37℃恒温箱,24h。 (6)菌种保藏:临时、长期保存法。 * 菌种的保存 1、临时保藏:接种到固体斜面培养基,菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存:甘油冷冻管藏法 -20 ℃冷冻箱保存 * 二、培养基对微生物的选择作用 * (一)、基础知识 1、纤维素与纤维素酶 【案例】分解纤维素的微生物的分离 纤维素是一种多糖 纤维素酶是一种复合酶 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 * (二)、筛选 1、方法: 刚果红染色法 原理:刚果红(CR)可以与纤维素形成红 色复合物,当纤维素被纤维素酶分 解后,红色复合物无法形成,出现 以纤维素分解菌为中心的透明圈, 我们可以通过是否产生透明圈来筛 选纤维素分解菌。 * 常用的刚果红染色法有两种 方法一:在长出菌落的培养基上,覆盖1mg/mL的CR 溶液,10—15min后,倒去CR溶液,加入 1mol/L的NaCl溶液,15min后倒掉NaCl溶液。 方法二:配制质量浓度为10mg/mL的CR溶液,灭菌 后,按照每200mL培养基加入1mL的比例加入 CR溶液,混匀后倒平板。 一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红 * (1)土壤取样 (2)选择培养(可省略) (3)梯度稀释 (4)涂布培养 (5)挑选产生透明圈的菌落 (6)微生物培养(纯培养) (三)、实验流程 * 三、测定微生物的数量 * (一)测定微生物数量的方法 1.直接计数法 最常用:显微镜直接计数法 (方法、优点、缺点、适用条件) 一、基础知识 * 2、间接计数法: 最常用的是稀释平板计数法 稀释平板法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 * (一)测定饮用水中大肠杆菌的数目 配制EMB培养基 倒平板 接种(滤膜法) 培养 观察记录 二、实践案例 * 1、土壤取样 (二)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 2、配制培养基 尿素琼脂培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 * * 3、样品稀释 细菌:一般选用104 、105 、106倍的稀释液进行培养 放线菌:一般选用103 、104 、105倍的稀释液 真菌:一般选用102 、103 、104倍的稀释液 4、取样及平板接种(涂布平板或混合平板) * 在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂, 指示剂变红,就可以准确的鉴定该种细菌能够分解尿素。 5、培养与观察: 细菌:30~370C的温度下培养1~2d; 放线菌:25~280C的温度下培养5~7d; 霉菌:25~280C的温度下培养3~4d。 * 当菌落数目稳定时,选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同

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