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第五章 酶促有机化学反应 酶促研究化学反应的特点 ·高效性 选择性 条件温和 环境友好 需要解决的问题 反应类型少。 ·及能用于酶促反应的酶和底物少 操作参数窄。 ·在有机溶剂中应用少。 ·易被底物和产物抑制 酶制剂的选择与修饰 酶制剂:纯酶、粗酶、含酶细胞 酶状态:游离酶、修饰酶、微团酶、固相酶 选择因素:反应类型、反应条件、规模 修饰方法:表面活性剂、脂肪酸、单甲氧基聚乙二醇、 右旋糖苷 ·目的:改变溶解性能,改变pH,加强酶和底物的相互 作用 如人工合成的类脂化合物(含有亲水性的五羟基已酰基 和疏水性的十二烷基链的化合物),可以通过亲水性的 基因吸附在酶分子的表面.在经过冻干处理之后,疏 使酶容易溶解在有机溶剂中。用该 可以使酶催化效率提高数十倍 微团酶 活细胞中的酶大多数都 处于水一有机介质的界 米米 面上,即生物膜的内外 正向 反向团 解体囊 表面 微团酶是人们根据生物 膜的结构和性质,设计 的一种由水、表面活性 剂和有机溶剂三种成分 组成的微团结构,把酶 米 和底物在其中,借此 模拟酶在活细胞内的功 能 图5-2丧面括性剂和水含量对形成反向微团性质的影响 一表面活性剂浓度恒定,水量增加,则徽团尺十增大,而团数量减少 2表面活性剂和水量等比例增大则微团尺寸保持恒定,而微团数量糟多 一表面活性判浓度增加,水量保持不变,则微出尺寸减少,而且数量增多 固定化酶 优点: a.可以重复使用; b.提高酶的稳定性 C.反应产物容易分离,无蛋白质污染 d.可以通过选择固定化方法改变酶的最适反应条件和 反应的过程。 固定化方法: a通过物理吸附原理将酶吸附在固体载体的表面: b通过使用双功能团试剂,将酶共价偶联在载体上 c包埋在微囊内 酶催化的水解反应 水解酶特性 种类多,丝氨酸蛋白水 解酶:如胰蛋白面、胰R Ni R, NHR, 凝乳蛋白酶和弹性蛋白 Ryo 酶。可催化多肽、氨基 0 Enz R HO 0 树脂、羧酸酯的水解。 甚中间物 专一性不严 院基转移 正逆反应都能催化 亲核试刑=HOR2OH,RN,HO2 其他亲核试剂竞争。 5-3蛋白水解酶在有机海剂中的催化反应类型 立体选择性及其在对映体拆分中的应用 当酶水解消旋化的底物时,由于酶活性中心的手性选 择性.消旋化底物中的一个对映体以较高的速率被酶催 化水解。这种现象被称为酶的动力学拆分。 R X R 降水解 H2O 消旋化底物 容易分离的手性混合物 图5-4对映异构体的酶催化水解拆分 水解酶的类型 类型: 是题:r东解手植的、2马肝酶,高选择:乙酰胆做雨酶 脂肪酶:能将甘油三酯水解成脂肪酸和甘油的酶。对一般酯中手性 酸酯更有效。 界面激活作用:当溶液中底物浓度比较低的情况下,脂肪酪几 乎不显示催化活性。然而,当底物浓度逐渐增加,超过它的溶解 极限时,脂肪酶的活性明显增加。脂肪酶在临界胶束浓度下并不 解底物,但超 底物浓度表现出 具有比较厂泛的底物适应性。能选择性地水解由L一构型羧酸所 形成的酯。 糖苷水解酶:淀粉酶,纤维素酶 菌酶等。能水解由糖的半缩 水形成的糖苷键。能选择性地水解由D一构型单 糖之间形成的糖苷键。 提高选择性方法 ·底物修饰:通过底物结构的修饰,可以得到更适合的 底物,从而改进酶催化反应的选择性。适合所有类型 的酶转化反应。 加入有机溶剂:在反应体系中加入与水互溶性有机溶 剂如甲、叔醇,因酮、一氧交环,、二甲基 择 对映体选择性抑制:某些手性碱(如某些胺和氨基醇等) 的加入对脂肪酶的选择性有很大的影响。动力学研究 表明,手性碱对脂 肪酶分子的作用是非竞争性抑制,即手性碱与酶的作 用部位不是酶的活性中心而是调控部位。脂肪酶与这 种非竞争性抑制剂结合后,对消旋化底物中两个对映 的催化作用影响显著不同,从而使酶的催化选择性 得到提高。