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酶的高通量筛选与定向筛选
生物催化简介
生物催化与转化是以细胞或酶作为催化剂进行物质转
化,大规模生产化学品、医药、能源、材料的科学。
优点:一个生物催化剂可以催化一系列底物甚至很多非天然底物;酶
高度的选择性尤其在立体和区域选择方面
剂无法
拟的优越性;生物催化反应通常反应条件温和具有环境友好性
缺点:生物催化剂在目的介质中的不稳定性导致的活性降低甚至完全
丢失:虽然生物催化剂可以供化我们所知的备种反应,但对
可
实际应用取决于它与传统工业过程的竞争,只有在竞争获得明显的经
济优势才能得到生产应用
催化研究过程
Substrate
Productien
Pr。dut
日 cocatalyst
asmn;器?
Feint
applicati。n
characterization
siranliry
Biocatalyst
BI。 catalyst
production
eu←m
海的筛选
酶的筛选可分为选择培养基筛选法和检测培养基筛选法。
选择培养基筛选法
還婆招读楚恳离藝得’苔的齧而其它南的生
单一碳源的选择性培养基,使能够利用反应底物的微生物获得生长优
得营养生长受到
制,从而得到所需的目的菌株。
互补的方法,即在有营养缺陷的培养基上筛选能合成该种营养物质的菌
检测培养基筛选法
通常是在培养基中如入某种试剂或化学药物,使培养后发生某种可以
辨别的变化,如培养基的透明度的变化或菌落周围颜色的变化
区别不同类
徒4这社没
通量筛选。
的高通量筛选
和荧光检测的高通量筛选
基于检测培养基筛选法的,生色基团
或荧光基团的底物参加的催化反应是最容
易实现高通量筛选的。
通过监测反应过程中的颜色和荧光的变化可
以有效地监测反应的进行
使用比色计或荧光计检测显色或荧光底物
pH指示剂显色反应和荧光共振能量转移还可以
实现高通量实时检测。
和荧光检测的高通量筛选
底物的高通量筛选
●大部分荧光和显色底物都带高酸度的苯酚或苯胺
离去基团,当前广泛应用的是以硝基苯和伞形酮
衍生物作为底物的检测方法
●基于这种技术的检测方法简单快捷,结果准确容
易实现数字化,可以做到实时监控,得到了广泛
的应用。
但这类底物通常不够稳定,反应特异性差,反应
速度快,比普通底物高出儿个数量级,不适用
些难转化的和难合成的反应以及粗酶催化的反
应和一些条件剧烈的反应,如高温,高的pH值
Quick E示意图
Eons
ED73
E015
contral
t= oh t=20min t=Tt=3h
和荧光检测的高通量筛选
能量转移底物的高通量筛选
荧光共振能量传递底物,不仅有非常好
的静态定位能力,也能提供分子内或分子
间两个荧光基团在距离和方向上的动态变
化
将这种方法扩展,可用于研究生物多聚
体的组成动力学、DNA限制性内切酶酶切
反应,以及DNA发夹结构的去折叠等。这
种技术最近被用来检测核糖核酸酶反应
性
化红外检测的高通量筛选
称车的热原以装摄鑫间生平回氧测器从
成像中表现
点,相反吸热反应表现
点,通过对“热”点
分辨,可以检测反应的进行与否
.5M
红外检测技术是一种新颖的
有发展前途的高通量筛选技术
它不需要生色基团或荧光
的加入,避免了比色和
测方法的局限性,但是这种
术目前还无法进行定量,只
检测催化活性较高的酶,对
活的进一步研究还需借助
法,方法本身还需
的发展和完善
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