酶高通量筛选与定向筛选.pptVIP

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酶的高通量筛选与定向筛选 生物催化简介 生物催化与转化是以细胞或酶作为催化剂进行物质转 化,大规模生产化学品、医药、能源、材料的科学。 优点:一个生物催化剂可以催化一系列底物甚至很多非天然底物;酶 高度的选择性尤其在立体和区域选择方面 剂无法 拟的优越性;生物催化反应通常反应条件温和具有环境友好性 缺点:生物催化剂在目的介质中的不稳定性导致的活性降低甚至完全 丢失:虽然生物催化剂可以供化我们所知的备种反应,但对 可 实际应用取决于它与传统工业过程的竞争,只有在竞争获得明显的经 济优势才能得到生产应用 催化研究过程 Substrate Productien Pr。dut 日 cocatalyst asmn;器? Feint applicati。n characterization siranliry Biocatalyst BI。 catalyst production eu←m 海的筛选 酶的筛选可分为选择培养基筛选法和检测培养基筛选法。 选择培养基筛选法 還婆招读楚恳离藝得’苔的齧而其它南的生 单一碳源的选择性培养基,使能够利用反应底物的微生物获得生长优 得营养生长受到 制,从而得到所需的目的菌株。 互补的方法,即在有营养缺陷的培养基上筛选能合成该种营养物质的菌 检测培养基筛选法 通常是在培养基中如入某种试剂或化学药物,使培养后发生某种可以 辨别的变化,如培养基的透明度的变化或菌落周围颜色的变化 区别不同类 徒4这社没 通量筛选。 的高通量筛选 和荧光检测的高通量筛选 基于检测培养基筛选法的,生色基团 或荧光基团的底物参加的催化反应是最容 易实现高通量筛选的。 通过监测反应过程中的颜色和荧光的变化可 以有效地监测反应的进行 使用比色计或荧光计检测显色或荧光底物 pH指示剂显色反应和荧光共振能量转移还可以 实现高通量实时检测。 和荧光检测的高通量筛选 底物的高通量筛选 ●大部分荧光和显色底物都带高酸度的苯酚或苯胺 离去基团,当前广泛应用的是以硝基苯和伞形酮 衍生物作为底物的检测方法 ●基于这种技术的检测方法简单快捷,结果准确容 易实现数字化,可以做到实时监控,得到了广泛 的应用。 但这类底物通常不够稳定,反应特异性差,反应 速度快,比普通底物高出儿个数量级,不适用 些难转化的和难合成的反应以及粗酶催化的反 应和一些条件剧烈的反应,如高温,高的pH值 Quick E示意图 Eons ED73 E015 contral t= oh t=20min t=Tt=3h 和荧光检测的高通量筛选 能量转移底物的高通量筛选 荧光共振能量传递底物,不仅有非常好 的静态定位能力,也能提供分子内或分子 间两个荧光基团在距离和方向上的动态变 化 将这种方法扩展,可用于研究生物多聚 体的组成动力学、DNA限制性内切酶酶切 反应,以及DNA发夹结构的去折叠等。这 种技术最近被用来检测核糖核酸酶反应 性 化红外检测的高通量筛选 称车的热原以装摄鑫间生平回氧测器从 成像中表现 点,相反吸热反应表现 点,通过对“热”点 分辨,可以检测反应的进行与否 .5M 红外检测技术是一种新颖的 有发展前途的高通量筛选技术 它不需要生色基团或荧光 的加入,避免了比色和 测方法的局限性,但是这种 术目前还无法进行定量,只 检测催化活性较高的酶,对 活的进一步研究还需借助 法,方法本身还需 的发展和完善

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