蛋白纯化相关知识介绍.pptVIP

Per Pura Ad Astra through suffering to renown 从纯化到星辰 Evaluadon only ch Asposeslides for NET 4o dient P Evaluation only. Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo 71 Copyright 2004-2017Aspose Pty L  分享的主要内容: 1.一个经典的大肠杆菌表达蛋白实验: 包涵体纯化:包涵体纯化基本原理步骤,缓冲液选择的些原 离子交换的使用,规模化上样方法,蛋白的储存 可溶性蛋白纯化等:各种沉淀方法包括硫酸铵沉淀和PEI沉淀等 蛋白质的储存: 《蛋白纯化与鉴定实验指南》 2兴风作浪的乳糖操纵子 3汇报蛋白纯化实验的基本格式: 4常见的柱层析在位清洗和金属鳌合柱再生方法 经典的基本的蛋白质纯化技术分为两类: 粗分级分离:硫酸铵沉淀法和等电点沉淀法,PE沉淀等 层析技术:离子交换层析和疏水作用层析,亲和层析等等 Valadon onry. ch Asposeslides for NET 4o dient P Evaluation only. Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo 71 Copyright 2004-2017Aspose Pty L  OV) 鹰 分高方法 方法的基础 分离方法 方法的基础 沉淀法 层析法 硫酸铵 溶解度 离子交换层析 电荷,电荷分布 丙醒 疏水作用层析 水性 聚乙烯亚胺 电荷,大小 反相FPLC 疏水性,大小 等电点 溶解度,pl 亲和层析 配体结合位点 相分配法(如,用聚乙二醇)溶解度 DNA亲和层析 DNA结合位点 电涨法 外源凝集素亲和层析糖基内容与种类 凝胶电泳 电荷,大小,形状 团定化金属亲和层析 金属结合能力 等电聚焦电泳 免疫亲和层析 特异抗原位点 大小,形状,密度层折蒙焦 大小,形状凝胶过滤层析大 大小,形状 Valadon onry. ch Asposeslides for NET 4o dient P Evaluation only. Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo 71 Copyright 2004-2017Aspose Pty L  实验3可溶性提取物(核心RNA聚合酶-a32复合物)的 聚乙烯亚胺沉淀和免疫亲和层析 Since 1989, Cold Spring Harbor Laboratory 蛋白质纯化与鉴定研习班 通过四组具有代表性的、四种不同原材料出 发的蛋白质:钙调蛋白、转录因子AP1、重 组Sgma32和胰岛素受体。具体介绍现代生 物学和医学实验室中一系列常用的蛋白质纯 化与鉴定技术。 Bill studier Richard R. Burgess T7 RNA RNA polymerase and the transcription duction system Valadon onry. ch Asposeslides for NET 4o dient P Evaluation only. Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo 71 Copyright 2004-2017Aspose Pty L  溶解,离心 用09mLNC洗涤,离心 细破和包洒体的制备(实验1) 上(弃沉)(D) 上满(弃沉定){G) 大杆菌妞胞(3g湿重) 加入A至55%饱和度,离心 解冻,重恶于20m含02%DOC的冲液A 上傭(弃沉淀)《 冰浴。超声破菌,投拌10~20mn 免燕和层析(实验3) 粗制裂解物(A) 缸样,冼柱,冼 詛,统,洗题 13000/mi离心10 收集EC峰 枚集1AC幢(弃穿过峰和洗柱液 过邮和洗柱液 包涵体沉淀(y2) 上清(模心RNA聚合。复合物 溶解和黑折叠(实验 PE淀利LAC层析(实验 沉淀(用子折叠 可溶性提隶液(用于LAC 题美提纯的自 用D洗群离心 加入03%FE,商 定量(实验 沉淀(弃上)c PE沉淀(弃上清)(E 用2%00洗荣,离心 冼好的PEI沉淀《弃上清)(F) 图3-1纯化大肠杆菌RNA聚合酶d亚基的流程国 Valadon onry. ch Asposeslides for