中药制剂分析 仪器分析法 紫外可见分光光度法基本原理—陈晨.pptVIP

紫外-可见分光光度法基本原理 透光率定义： T 取值为0.0 % ~ 100.0 % 全部吸收 T = 0.0 % 全部透射 T = 100.0 % 入射光 I0 透射光 It 二、朗伯—比尔定律 （一）百分透光率（T）和吸光度（A） 显然，T↑，溶液吸收度↓；T ↓，溶液吸收度↑。 透光率的倒数反映溶液对光吸收程度，即吸光度。 A = lg 1 T = -lgT = lg I0 It A=-lgT , T=10-A Ia Ir 1760年，Lambert从实验中找到了A与液层厚度的关系式： A = k1L 当入射光波长、溶剂和吸光物质种类、浓度和溶液的温度都一定时，该溶液的吸光度只与液层厚度成正比 1852年，Beer从实验中找到了A与溶液浓度的关系式： A = k2 c 当入射光波长、溶剂和吸光物质种类、液层厚度和溶液的温度都一定时，该溶液的吸光度只与溶液浓度成正比 朗伯定律： A=k1 ×L 比尔定律： A=k2×C A=k C L 　一束平行单色光通过一均匀、非散射的吸光物质溶液时，在入射光的波长、强度以及溶液温度等保持不变时，该溶液的吸光度A与其浓度C及液层厚度L的乘积成正比。 ①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。 ③吸光度A具有加和性。Aa+b+c= Aa + Ab + Ac 注意! 适用范围 朗伯-比尔定律: 吸光系数 浓度 液层厚度 2、百分吸光系数 / 比吸光系数 ： 1、摩尔吸光系数?： 在一定λ下，c=1mol/L，L=1cm时的吸光度。单位：L/(mol.cm) 一定条件下是一个特征常数。 在温度和波长等条件一定时，ε仅与物质本身的性质有关，与待 测物浓度c和液层厚度L无关； 定性和定量分析依据：同一物质在不同波长时ε值不同。 不同物质在同一波长时ε值不同。 一定λ下,c=1%(W/V)，L=1cm时的吸光度。单位：ml/g.cm 1g/100ml （三）吸光系数 末端吸收 最强峰 肩峰 峰谷 次强峰 ?max ?sh ? min ? A 一、吸收光谱 以A为纵坐标， λ为横坐标， 绘制的λ~A曲线。 特征值 ●同一物质的吸收光谱特征值相同, (每一波长处吸光系数相同)。 　同一物质相同浓度的吸收曲线重合。 ●同一物质不同浓度，其吸收曲线形状相似,λmax相同。（定量） ●不同物质相同浓度，其吸收曲线形状、λmax不同。（定性） 定性、定量分析： 在吸收曲线λmax 处测吸光度A。 三、偏离朗伯-比尔定律的主要因素 依据Beer定律，A与C关系应为经过原点的直线 （一）化学因素 （二）光学因素 偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面： （一）光学因素 1．非单色光的影响：入射光为单色光是应用该定律的重要前提： 2．非平行入射光、反射、散射等的影响 浓度过高引起偏离 溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化也会引起偏离。 （二）化学因素 （三）仪器因素