动物微生物应用技术 细菌标本片的制备及染色方法 细菌标本片的制备和染色方法.pptVIP

（1）涂片 → 干燥 → 固定 2 1 * * 固定的目的和方法 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次 * * （2）草酸铵结晶紫染色1min → 水洗干燥 * * 结晶紫初染１分钟 　　　　水　洗 * * （3）碘液媒染1min 水洗 → 干燥 * * 碘液媒染　１分钟 水　洗 （3）碘液媒染1min 水洗 → 干燥 * * 　（4）95%乙醇脱色15～30秒 → 水洗干燥 * * 酒精脱色　３０秒 水　洗 * * 　（4）95%乙醇脱色15～30秒 → 水洗干燥 （5）番红复染30S～1min → 水洗 干燥 → 镜检 * * 番红复染　３０秒 水　洗 * * （5）番红复染30S～1min → 水洗 干燥 → 镜检 做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果。 固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。 每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加，以免蒸发干，影响染色效果。 每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。 注意事项： 本次课 就到这里了！ 再见 ！ * * * * * * * 动物微生物应用技术 教 师：刘莎莎 细菌标本片制备及染色方法 掌握细菌常用标本片的制作及染色方法； 认识革兰氏染色的反应特性； 一、实训目的 二、实训器材 病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。 三、实训内容 （一）细菌标本片的制作 （二）血液推片的制作 （三）常用的细菌染色方法 （四）常用染色液的配制 （五）注意事项 （一）细菌标本片的制作 1.涂片 2.干燥 3.固定 固体培养物：取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。 （一）细菌标本片的制作 1.涂片 液体培养物：取清洁载玻片一块，将接种环在火焰上灭菌，待冷后取一滴培养液或液体，置于玻片中央，混均匀，涂成直径约为1cm的涂面。 病变组织抹片：做无菌切开，用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。 （一）细菌标本片的制作 1.涂片 在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上方30～40cm来回微烤使其干燥。 2.干燥 火焰固定：将干燥后的玻片涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。 化学固定：将干燥后的玻片浸入甲醇（乙醇、丙酮）中，或在玻片上滴数滴甲醇，2～3分钟后自然挥发干燥。 3.固定 （二）血液推片的制作 取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取一滴血液，在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。 1.取血：将血液滴在载玻片上。 2.推片：以左手拿该片，用另一个载玻片作推片，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。 * * 让血液粘附在推片上 推出均匀的血膜 * * 窍门：将载玻片的一端垫起，有助于推出均匀血膜。 * * （三）常用的细菌染色方法 （三）常用的细菌染色方法 1.单染法：又叫简单染色法，即只用一种染料进行染色。 （1）美蓝染色法 染色液配制：甲液：美蓝0.3g、95%酒精30mL；乙液：0.01%苛性钾溶液100mL。先配甲液，将美蓝放入研钵中，徐徐加入酒精研磨均匀后，把甲、乙两液混合，过夜后用滤纸过滤即成。新鲜配制的美蓝液染色不好，陈旧的染色好。 （三）常用的细菌染色方法 1.单染法：又叫简单染色法，即只用一种染料进行染色。 染色方法：在已固定好的抹片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2～3min，水洗，吸水纸轻压吸干或晾干和镜检，结果菌体呈蓝色。 （1）美蓝染色法 （2）瑞氏染色法： 染色液的配制：取瑞氏染料0.1g，纯中性甘油1ml，在研钵中混合研磨，再加入甲醇60ml，使其溶解，装入中性瓶中过夜，次日过滤，盛入棕色瓶中，暗处保存。保存越久，染色越好。 染色方法：细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片上以固定标本，1～3min后，再滴加与染色液等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗，干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈其他颜色。 （2）瑞氏染色法： 2.复染 （三）常用的细菌染色方法 革兰氏染色原理 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理