动物微生物应用技术 病毒及病毒类疾病的实验室诊断 病毒的培养技术.pptVIP

动物微生物应用技术 教 师：刘莎莎 任务二：病毒的培养技术 一、病毒增殖 以自身基因组为模板，借助宿主细胞的酶类，复制出病毒的基因组，病毒的基因组经过编码产生大量的病毒蛋白质，经过装配，形成子代病毒。 复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配与释放。 病毒本身没有独立的蛋白合成酶系统，必须借助宿主细胞的蛋白合成体系合成病毒蛋白。 * * 病毒的增殖过程 * * 成熟 脱壳 早期蛋白 DNA复制 核酸游离 晚期蛋白 吸附 穿入 释放 装配 一、病毒增殖 吸附——病毒与细胞接触，依赖病毒吸附点，通过包膜表面或表面的配体蛋白与相应的受体结合； 穿入——融合（有包膜）、吞饮（无包膜）、直接穿入； 脱壳——宿主细胞溶酶体作用下，衣壳破裂、释放核酸； 生物合成——随核酸类型而异(复制、转录、翻译)； 装配——子代病毒核酸和结构蛋白组装成病毒核衣壳。核内装配、核外装配； 释放——离开宿主细胞，出芽、挤破、细胞分裂。 * * 一、病毒增殖 脊椎动物 病毒繁殖 1.吸附:病毒通过刺突与细胞受体特异结合吸附到寄主细胞上 2.侵入:病毒被吞噬到囊泡中, 囊膜破裂, 病毒核酸被释放到细胞质。 3.脱壳和生物合成: 在病毒基因控制下, 细胞合成新病毒的基本成分，核酸、衣壳粒蛋白和刺突蛋白。 4.成熟装配:刺突蛋白整合到形成病毒囊膜的细胞膜中,核酸和衣壳粒蛋白装配成核衣壳。 5.释放:有囊膜病毒以出芽方式离开细胞膜,携带着含刺突的囊膜。成熟的病毒粒子具侵染性。 * * 动物接种 病毒通过注射、口服等途径进入易感动物体内并大量繁殖，使动物产生特定反应。 要求：被接种的实验动物健康。血清中无相应的病毒抗体。 用途：病原学检查、传染病的诊断、抗血清制造及疫苗效力检验。 缺点：实验动物难于管理、成本高、个体差异大。 * * 二、病毒人工培养 鸡胚培养法 病毒接种于鸡胚后，观察病毒的增值情况，可根据鸡胚的病变和病毒抗原检测等方法进行判断。 要求：鸡胚健康、不含特异性病毒抗体、SPF鸡胚。 接种途径：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊等 用途：病毒的分离、鉴定、病毒复制、制备抗原和疫苗。 * * 二、病毒人工培养 细胞培养法 在体外利用离体的活细胞进行病毒培养的方法。能导致细胞病变（变形）或者出现血细胞吸附和血凝现象。 细胞：原代细胞、二倍体细胞株、传代细胞。 用途：病毒的分离、增值，病毒抗原疫苗制备，中和试验、病毒空斑测定、克隆纯化等。 优点：离体活细胞不容易受机体免疫力影响，病毒易于生长；可人工选择多种敏感细胞供病毒生长，病毒产量高；易于观察病毒的生长特征；便于收集病毒做进一步检查。 * * 二、病毒人工培养 本次课 就到这里了！ 再见 ！ * * * * *