培训中心 企业培训 11高效液相色谱仪标准操作程序-3.pptxVIP

药品分析仪器 操作技术 药品质量与安全专业教学资源库 高效液相色谱仪使用与操作规程 药品质量与安全专业教学资源库 胡家栋 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 保留时间变化 1.柱温变化 2.等度与梯度间未能充分平衡 3.缓冲液容量不够 4.柱污染 5.柱内条件变化 6.柱快达到寿命 1.柱恒温 2.至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.用25mmol/L的缓冲液 4.每天冲洗柱 5.稳定进样条件,调节流动相 6.采用保护柱 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 保留时间缩短 1.流速增加 2.样品超载 3.键合相流失 4.流动相组成变化 5.温度增加 1.检查泵,重新设定流速 2.降低样品量 3.流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.防止流动相蒸发或沉淀 5.柱恒温 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 保留时间延长 1.流速下降 2.硅胶柱上活性点变化 3.键合相流失 4.流动相组成变化 5.温度降低 1.管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 2.用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 3.流动相PH值保持在3～7.5检查柱的方向 4.防止流动相蒸发或沉淀 5.柱恒温 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 出现肩峰或分叉 1.样品体积过大 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 5.进样器损坏 1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 4.更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.更换进样器转子 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 鬼峰 1.进样阀残余峰 2.样品中未知物 3.柱未平衡 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 5.水污染(反相) 1.每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.处理样品 3.重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) 4.每天新配,用抗氧化剂 5.通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 基线噪声 1.气泡(尖锐峰) 2.污染(随机噪声) 3.检测器灯连续噪声 4.电干扰(偶然噪声) 5.检测器中有气泡 1.流动相脱气,加柱后背压 2.清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 3.更换氘灯 4.采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 5.流动相脱气,加柱后背压 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 峰拖尾 1.柱超载 2.峰干扰 3.硅羟基作用 4.柱内烧结不锈钢失效 5.柱塌陷或形成短路通道 6.死体积或柱外体积过大 7.柱效下降 1.降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 2.清洁样品,调整流动相 3.加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 4.更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 6.连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 7.用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 峰展宽 1.进样体积过大 2.在进样阀中造成峰扩展 3.数据系统采样速率太慢 4.检测器时间常数过大 1. 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.进样前后排出气泡以降低扩散 3.设定速率应是每峰大于10点 4.设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% 高效液相色谱仪中常遇见的问题及处理方法 峰展宽 5.流动相粘度过高 6.检测池体积过大 7.保留时间过长 8.柱外体积过大 9.样品过载 5.增加柱温,采用低粘度流动相 6.用小体积池,卸下热交换器 7.等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 8.将连接管径和连接管长度降至最小 9.进小浓度小体积样品 谢谢观看 药品质量与安全专业教学资源库