2018仪器分析 高效液相色谱仪 《仪器分析》课程教案-模块三项目二高效液相色谱仪.docVIP

教学方案 《仪器分析》 教学方案 课程名称： 仪器分析 课程代码： 课程性质： 专业课程 课程学时： 60 学时 课程学分： 4学分 黑龙江农业经济职业学院/食品加工技术专业 2017年07月制定 教学方案 项目二 高效液相色谱仪 教学方案 授课班级 课时 2学时（90分钟） 授课时间 授课地点 多媒体教室 教学工具 投影仪 教学目标 专业能力：掌握高效液相色谱仪的工作过程、各部分部件的工作原理、作用及使用注意事项； 社会能力：诚实守信、法律意识 方法能力：作决定和计划能力、时间管理的能力 教学方法 项目教学、理论讲授 教学过程 内容 教学环境 时间分配 下发任务单 教室给每位学生发放工作任务单，课程结束后上交。 教室 5分钟 组织教学 知识要点讲授 介绍本次课程的主要内容，本次课程重点与难点。讲授高效液相色谱仪工作流程、股部分主要部件的工作原理。 教室 60分钟 任务单的填写 学生根据工作任务单要求，独立完成任务单的填写 教室 10分钟 上交任务单，共同完成任务单内容的讨论及答疑 上交任务单，由学生根据任务单的问题进行回答，教师指出问题讲解。针对本次课程的内容学生进行提问，教师答疑。 教室 15分钟 总计 90分钟 附件1 工作任务单 任务名称 姓名 填写时间 查阅材料 高效液相色谱仪的工作流程 高效液相色谱仪的注意部件色谱法的相关术语 何为梯度洗脱 附件2教学内容 项目二 高效液相色谱仪 一、高效液相色谱仪的结构及要求 高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。见图3-2-1。 图 3-2-1高效液相色谱仪结构图 1. 贮液器 贮液器是用于贮存溶剂，盛放流动性液体，溶剂必须是高级纯试剂，贮液器必须耐腐蚀，对溶剂呈惰性，脱气方便。通常采用1-2L的大容量的玻璃瓶，也可以用不锈钢材料和 聚四氟乙烯材料制成。贮液器应配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵体内，溶剂过滤器空隙一般为2μm 。是耐腐蚀材料制成。 2.高压泵 高压泵用于输送流动相，因为液体的粘度比气体大102倍，同时固定相的颗粒极细，柱内压降大，为保证一定的流速，必须借助高压迫使流动相通过柱子。 高压泵应无脉动或脉动极小，以保证输出的流动相具有恒定的流速，使流动相的流量变动范围不宜超过2-3%。泵应耐压、耐腐蚀、密封性好。 泵有恒压泵和恒流泵两类。 恒压泵输出的压力恒定，如气动放大泵。输出压力恒定，从而得到压力恒定的流出液。恒流泵输出的流量恒定，如往复柱塞泵、螺旋传动注射泵等。它与恒压泵不同，可以得到一个压力恒定的流出液。但流量随外界阻力而改变。因此，恒流泵逐渐取代恒压泵。若采用双活塞泵，使双活塞在相移1800下工作，可使脉动互相抵消，减速小噪声。 对高压输液泵的要求： （1）泵体材料能耐化学腐蚀。 （2）能在高压下连续工作。通常要求耐压40---50MPa,，能连续工作8—24h。 （3）输出流量稳定，重复性高。高效液相色谱使用的检测器，大多数对流量变化敏感，高压输液泵应提供无脉冲流量。 3. 梯度洗脱装置 对比较简单的分析问题，可以采用一种均匀的混合溶剂作流动相。如果此时分离不良，或分析时间过长，可以采用梯度洗脱的方法，它极类似于气相色谱中程序升温的作用。 梯度洗脱是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种方法。通过梯度装置将两种或三种、四种溶剂按一定比例混合进行二元或三元、四元梯度洗脱。梯度洗脱一般采用低压梯度，低压梯度采用低压混合设计，只需一个高压泵。在常压下，将两种或两种以上溶剂按一定比例混合后，再由高压泵输出，梯度改变可呈线性、指数型或阶梯型 梯度洗脱的优点是：提高柱效；改善峰形；减少样品的分析时间；使强烈滞留的组分不容易残留在柱上，因而可保持色谱柱的性能良好。 缺点：在进行下次分析时，更换流动相达到平衡的时间长。 4.进样器 高效液相色谱进样普遍使用高压进样阀，如流通进样阀。用微量注射器将样品注入样品环管，样品环管有不同的尺寸（从10μL到2mL），可根据分析要求选用。样品通过注射器经六通阀进入样品环管后，然后将手柄转到进样位置，此时流动相便将样品带入柱子。 5. 色谱柱 （1）概述 色谱柱是色谱分离系统的核心部分，装有不同类型填料的色谱柱与相对应的流动相形成了不同的分离机制，对绝大多数有机化合物进行分离分析。它的质量优劣直接影响样品的分离效果。色谱柱通常采用优质不锈钢管制成。柱长一般为10 cm -25cm，内径4 mm -5 mm。为了保护分析柱不被污染，有时需在分析柱前加一短柱，约数厘米长。此柱称为卫柱。为了防止由于卫柱而过分增加柱阻力，在卫柱中使用的颗粒