【课件-实用生物医学实验技术】_组织病理标本处理和观察中需要特别注意的问题.pptVIP

组织病理标本处理和观察中需要特别注意的问题 复旦大学基础医学院 生理与病理生理学学习 主要内容 标本采集、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色 、封片、观察 标本采集 标记：特异性、详细、各种标本的相关性 #1？, 2014-2-2-2？ 大体拍照：特异性、详细 不同组织取材的特殊处理 脑组织：对缺氧敏感容易自溶 劳动保护 去血灌洗：避免血液对观察的影响--- 标记的细胞或大分子的跨血管运动 固定 固定的目的和原理：分子交联、防止细菌的腐蚀和组织的自溶 固定液—甲醇、乙醇、多聚甲醛等 固定液要充足：5倍 固定时间 标本大小 应用液：3.7% paraformaldehyde (多聚甲醛) + 1.0% methanol(甲醇 ) 储存液： 37% paraformaldehyde (多聚甲醛) + 10% methanol(甲醇 ) 脱水 原因：水与透明剂及石蜡不相融合 酒精--最常用的脱水剂 程序--70％一80％一95％一100％。 关键--无水酒精纯度 透明 目的：使光易于通透 作用：脱酒精、透明 透明剂：二甲苯、水杨酸甲酯 最常用的良好透明剂二甲苯： 1）溶于酒精、能溶解石蜡 2）不吸收水（也用做封固剂）--不再脱水了，要 防水防潮 3）透明能力强 4）易使组织收缩、变脆，时间0.5-1h 5）有害 浸蜡、包埋 目的：支撑作用，软硬适度 浸：要蜡完全渗入组织细胞、组织与石蜡混为一体 温度：比石蜡的熔点略高2度 时间：2-5小时 包埋：组织的方向 切片 修蜡 玻片处理：清洗；表面处理--甘氨酸、等离子、甘油、 切片厚度：4-10?m 切片机使用 捞、贴附切片：技术活 烤片：60℃烘烤过夜 使组织与玻片牢固粘贴 冰冻切片 OCT包埋（后固定）：防气泡、防切片前组织融化 前固定：蔗糖脱水， OCT包埋 切片：防组织块融化 后固定：吹干、丙酮、多聚甲醛等 保存：防细胞自溶、防冰晶（切片后不能再冻） 染色 染色剂和组织细胞的结合，不同的结构成份显示不同的颜色 注意点：特别注意重复使用的溶液 脱蜡要彻底 试剂浓度要准确 防止试剂中有沉淀物 合理调节染色的时间长短 常规石蜡切片H．E染色程序 1．二甲苯Ⅰ?????????? ?5-15分钟 2．二甲苯Ⅱ??????????? 5-15分钟 3．无水乙醇????????????3分钟 4．95％酒精???????????3分钟 5．80％酒精???????????3分钟 6．70％酒精???????????3分钟 7．自来水洗