KLF5对鸡骨骼肌卫星细胞增殖、分化和调亡的影响.pdfVIP

摘 要 KLF5 （Krüppel like factor 5 ）属于Krüppel 样转录因子家族中的一员，是一 个具有锌指结构域的转录因子，能够识别和结合目的基因启动子区的GC 盒，调 控目的基因的转录。有研究表明，KLF5 基因参与调控了哺乳动物多种细胞的增 殖、分化和凋亡过程，但是对禽类细胞的调控作用还未见报道。因此，本研究对 KLF5 基因在鸡细胞中的作用进行了探究。本次试验中，首先利用荧光定量RCR 技术检测KLF5 基因在鸡不同组织中的表达情况，之后利用 siRNA 干扰技术降 低KLF5 基因在鸡骨骼肌卫星细胞中的表达水平，探究KLF5 基因对鸡骨骼肌卫 星细胞增殖、分化和凋亡的影响，最后利用转录组测序技术，进一步探究KLF5 基因对鸡骨骼肌卫星细胞发育的作用机制。获得的主要结果如下： （1）KLF5 基因在鸡心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胸肌、腿肌、小肠、肌 胃、腺胃、脂肪和大脑12 个组织中均有表达，且在胸肌和腿肌中表达量最高。 （2 ）在鸡骨骼肌卫星细胞中干扰KLF5 基因的表达后检测细胞的增殖情况， 干扰组和对照组在干扰后72h 内细胞增殖速率无显著差异。增殖相关基因CCND1 和 PCNA 的mRNA 表达量在干扰后 72h 内与对照组相比也无显著差异。干扰 KLF5 的表达对鸡骨骼肌卫星细胞增殖无显著影响。 （3 ）在鸡骨骼肌卫星细胞分化期干扰KLF5 基因的表达，干扰组细胞在干 扰后72h 内无明显肌管生成，对照组细胞在72h 内逐渐分化，在72h 时完全分化 形成大量肌管。分化相关基因MYHC 和MyoG 的mRNA 表达量和蛋白表达量在 干扰后24h 、48h 和72h 均显著低于对照组 （P0.05 ）。免疫荧光图片同样显示干 扰KLF5 基因表达后，肌管形成受阻。干扰KLF5 基因的表达抑制了鸡骨骼肌卫 星细胞的分化。 （4 ）在鸡骨骼肌卫星细胞中干扰KLF5 基因的表达后检测细胞的凋亡情况， 干扰组细胞凋亡率显著高于对照组 （P0.05 ）。干扰组中促细胞凋亡因子 Caspase-3 基因的mRNA 表达量显著高于对照组（P0.05 ），而细胞生存素Survivin 基因的mRNA 表达量显著低于对照组（P0.05 ）。干扰KLF5 基因的表达促进了 鸡骨骼肌卫星细胞的凋亡。 （5 ）在鸡骨骼肌卫星细胞中干扰KLF5 的表达，并将干扰组和对照组细胞 进行转录组测序，共获得差异表达基因1195 个，其中729 个基因显著下调，466 I 个基因显著上调 （P0.05 ）。差异表达基因主要富集于肌肉组织的生长发育、肌 纤维特性、骨骼肌收缩、蛋白质结合和能量代谢等GO 条目。KEGG 富集分析发 现差异表达基因主要富集于Wnt 信号通路（Wnt signaling pathway ）、核糖体信号 通路（Ribosome ）、细胞外受体交互信号通路（ECM-receptor interaction ）和肥大 型心肌病信号通路（Hypertrophic cardiomyopathy ）等信号通路。 （6 ）在鸡骨骼肌卫星细胞中干扰KLF5 基因表达后，检测Wnt 通路中相关 基因的mRNA 表达量，与对照组相比，Wnt3a、Wnt5a、Wnt5b、Wnt7a、Wnt10a 和β-catenin 的mRNA 表达量均显著降低（P0.05 ）。 KLF5 基因对鸡骨骼肌卫星细胞增殖无显著调控作用，对其分化具有促进作 用，对其凋亡具有抑制作用，并可能通过 Wnt 信号通路调控鸡骨骼肌的发育。 本试验结果为研究鸡出生后骨骼肌生长发育的分子机制提供理论依据。 关键词：鸡；KLF5 ；骨骼肌卫星细胞；增殖；分化；凋亡 II Abstract KLF5 (Krüppel like factor 5) is a member of the Krüppel like factors subfamily of zinc finger transcription proteins, it is a basic transcription f