大口黑鲈鰤诺卡菌的耐药性及其感染的病理形态学研究.pdfVIP

中文摘要 鰤诺卡菌 （Nocardia seriolae ）是一种严重危害大口黑鲈 （Micropterus salmoides ）养 殖的重要致病菌。目前有关大口黑鲈源鰤诺卡菌的耐药表型和耐药基因流行情况，以及 其感染大口黑鲈病理形态学的研究尚不多见。本研究从四川主要大口黑鲈养殖区采集病 料，在其分离鉴定的基础上，开展耐药性、耐药菌基因、病理损伤特点及其感染病原分 布规律的研究，以期为临床有效用药提供参考，同时也为进一步阐明其致病机制提供资 料。 在 2017-2018 年间，从四川多个大口黑鲈主要养殖地共采集 69 份样品，通过形态 学、理化特性、16S rRNA 与hsp65 基因序列分析，分离鉴定出20 株大口黑鲈源鰤诺卡 菌。采用肉汤微量稀释显色法测定分离菌株对 18 种抗菌药物的耐药性。结果显示，20 株菌对青霉素、头孢噻呋、头孢西丁、奥格门汀和苯唑西林表现出耐药，耐药率达 100%。 对恩诺沙星和氧氟沙星耐药率分别达45% 、75% 。对磺胺异噁唑和复方新诺明耐药率均 为40% ；对氟苯尼考耐药率为20% ；对泰妙菌素耐药率为35%；20 株菌对多西环素、 红霉素、替米考星、庆大霉素、万古霉素、利奈唑胺和克林霉素敏感。采用 WaferGenSmartChip 超高通量荧光定量PCR 对分离株进行耐药基因检测，结果显示，四 环素耐药基因 tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetK、tetL、tetM、tetO、tetQ、tetS， 检出率分别为 100%、20% 、30%、85%、55%、100%、15%、10%、85%、30%、5%、 95% ；MLSB 耐药基因ermB、ermC、mefA 、msrA 、mphA 、lnuA、lnuB，检出率分别为 40% 、35%、65%、15%、75%、50%、55%；β- 内酰胺耐药基因blaSHV、blaTEM、blaVIM、 blaZ 、blaCMY 、blaCMY2 、bla1 ，检出率分别为 10%、100%、5%、15%、55%、60%、 15%；氨基糖苷耐药基因aac、aac(6 ’)-II 、aacA/aphD 、aacC 、aacC2 ，80%，80%，20% ， 20% ，55%；氯霉素耐药基因catB3、catB8、catA1 、cmlA1、cmx(A) 、floR ，检出率分别 为95%，95%，85%，20% ，95%，100%；多重耐药基因acrA 、acrB 、acrF 、mexA 、mexF ， 检出率分别为100%、100%、95%、5%、100%。比较发现，四川地区大口黑鲈鰤诺卡菌 的耐药表型与耐药基因型存在明显的地域与菌株间的差异性。 患病大口黑鲈大体病变主要有体表溃疡、鳍条充血，肝、脾、心、头肾、肾等多个 内脏器官出现结节。病理组织学上，肝、脾、肾、心、鳃等多个组织均出现慢性肉芽肿 I 结节，并伴随出血、变性、坏死和炎症反应等多种病理变化。其中，肉芽肿结节由干酪 样坏死中心、上皮样细胞层以及最外层的纤维结缔组织构成。切片革兰氏染色与电镜观 察发现大口黑鲈的肝、脾、肾、心、鳃等组织中存在大量的杆状细菌，且多位于肉芽肿 中心及其周围的坏死灶。免疫组化学染色显示，大口黑鲈的肝、脾、肾、头肾等多个组 织中均出现鰤诺卡菌阳性信号，且多位于肉芽肿中心及周围。综上，鰤诺卡菌感染大口 黑鲈，菌体可在肝、脾、肾、头肾、鳃等多个组织器官分布，同时造成这些组织器官的 损伤，并形成明显的肉芽肿性结节，这在病理诊断上具有重要的意义。 关键词：鰤诺卡菌；大口黑鲈；耐药性；病理损伤；病原分布 II Abstract Nocardia seriolae is an important pathogeny that seriously endangers the cultivation of Micropterus salmoides . At present, there are few studies on antimicrobial resistance characteristics, prevalence of resistance genes of N.