PDLIM3和PDLIM5基因对鸡骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响.pdf

摘 要 PDZ-LIM 超家族成员存在于多种细胞的细胞核内，它是由N 末端一个PDZ 结构域和 C 端的一个或多个 LIM 结构域组成。该家族共包括 10 个基因，其中 PDLIM3 、PDLIM5 基因已被证明能促进小鼠成肌细胞分化，参与调控骨骼肌的 生长发育。为探究鸡PDLIM3 和PDLIM5 是否存在同样的功能，本研究探究了 PDLIM3 和PDLIM5 基因在鸡出生前后胸肌中的表达，并在体外培养的鸡骨骼肌 卫星细胞分别干扰这两个基因的表达后，检测骨骼肌卫星细胞的增殖和分化情况， 最后通过转录组测序，分析了这两个基因参与的影响调控细胞增殖和分化的分子 通路，进一步探究了PDLIM3 和PDLIM5 基因对骨骼肌发育影响的相互作用。 主要结果如下： （1）RT-PCR 检测结果表明，PDLIM3 和PDLIM5 基因从10 胚龄到出壳7d 时的肉鸡胸肌骨骼肌中的表达量呈先升高后降低的趋势，且PDLIM5 基因在出壳 后不表达，两个基因分别在E18 和E12 时的表达量最高。 （2 ）鸡骨骼肌卫星细胞中分别干扰PDLIM3 和PDLIM5 基因后，细胞增殖 相关基因CCND1、CCND2、PCNA 基因mRNA 的表达量均显著下降（P0.05 ）， 此外EDU 和CCK8 检测结果也证实骨骼肌卫星细胞增殖受到抑制。 （3 ）鸡骨骼肌卫星细胞中分别干扰PDLIM3 和PDLIM5 基因后，干扰组中 肌细胞分化标志基因MyHC 、MyoG 、MyoD 的mRNA 表达水平都不同程度的降 低；选取转染24h，48h 和72h 的样品检测MyHC 和MyoG 蛋白丰度，均有不同 程度的下降，取转染48h 后的样品检测MyHC 荧光表达量，得出干扰组中荧光 表达量显著降低，因此干扰PDLIM3 和PDLIM5 基因抑制骨骼肌卫星细胞分化。 （4 ）转录组测序发现，干扰PDLIM3 基因表达的鸡骨骼肌卫星细胞与对照 组相比，差异表达基因主要富集在cGMP-PKG 、Oxytocin、MAPK、Tight junction 等信号通路，参与细胞骨架蛋白结合、肌动蛋白结合、肌肉组织再生和发育、黏 附作用等功能。 （5 ）转录组测序发现，干扰PDLIM5 基因表达的鸡骨骼肌卫星细胞与对照 组相比，差异表达基因主要富集在Tight junction、Oxytocin、p53 、MAPK 等信 号通路，参与肌细胞生成、肌肉收缩、肌细胞分化，同时参与细胞骨架蛋白结合、 肌动蛋白细胞骨架形成、肌动蛋白和辅肌动蛋白结合等功能。 I （6 ）干扰 PDLIM3 基因后 PDLIM5 基因显著升高；干扰 PDLIM5 基因后 PDLIM3 基因表达量显著降低，通过转录组测序得出PDLIM3 基因和PDLIM5 基 因共同富集到了MAPK 信号通路上。 综上所述，干扰PDLIM3 和PDLIM5 基因的表达可抑制鸡骨骼肌卫星细胞 的增殖与分化，PDLIM5 基因能够和 PDLIM3 基因相互作用并可能通过 MAPK 信号通路参与对卫星细胞生长发育的调节。 关键词：鸡；骨骼肌卫星细胞；PDLIM3 ；PDLIM5 ；增殖分化；转录组 II Abstract The PDZ-LIM superfamily member is present in the nucleus of many cells and consists of one PDZ domain at the N-terminus and one or more LIM domains at the C-terminus. The family includes 10 genes, of which PDLIM3 and PDLIM5 genes have been shown to promote mouse myoblast differentiation and participate in the regulation of