矮秆波兰小麦矮化基因Rht-dp的定位及克隆.pdf

摘 要 来源于新疆吐鲁番的矮秆波兰小麦（Triticum polonicum L., Dwarf Polish Wheat, DPW ）携带一个位于4BS 染色体的隐性矮化基因Rht-dp ，为赤霉素不敏感类型。本 研究利用SLAF-Seq-BSA 和SSR 标记对Rht-dp 进行遗传分析，并在56 份四倍体小麦 中进行候选基因克隆与分析。获得以下主要结果： 1.对DPW×HPW 杂种F2 代（850 个单株）进行株高统计分析：Rht-dp 是一个单 基因。 2.对DPW×HPW RILs F7 代进行SLAF-Seq 分析，将Rht-dp 初定位在4BS 染色体 上的154766751-343858300 区域。 3.在初定位区域筛选出13 对SSR 多态性标记，连锁分析发现有12 个单株与所有 标记不连锁。进一步分析筛选获得 3 对 SSR 多态性标记与这 12 个单株连锁。在 DPW×HPW RILs F 和F 代、DPW×简阳矮蓝麦RILs F 代群体进行连锁分析，将Rht-dp 7 8 6 定位于Xgpw2994.1 和Xgpw3128.1 标记之间。以中国春基因组（v1.0-assembly ）为参 考基因组，Rht-dp 位于在4BS 染色31286578 区域；该区域共有5 个编码 基因，将其中编码Rht1_wheat DELLA protein 的Rht-B1 作为候选基因。 4.在DPW 和HPW 中克隆Rht-B1 ，发现Rht-dp 与Rht-B1b 序列一致；根据DPW 和HPW 序列差异开发Rht-B1 Indel 标记，在DPW×HPW RILs F7 和F8 代、DPW×简 阳矮蓝麦RILs F6 代群体进行连锁分析，均与Rht-dp 共分离，证明Rht-dp 为Rht-B1b ； 同时，在56 份四倍体小麦中检验，发现该标记与株高性状不绑定。 5.在56 份四倍体小麦中进行Rht-dp 同源基因的克隆，通过序列比对，发现并命名 4 种类型的等位基因，发现Rht-B1IC12196 为Rht-B1b 。 关 键 词：矮秆波兰小麦；矮化基因；精细定位；克隆。 I Abstract Dwarf Polish wheat (Triticum polonicum L., DPW) from Turpan, Xinjiang, carries a recessive dwarfing gene Rht-dp on the 4BS chromosome, which is a GA-insensitive gene. In this study, the genetic analysis of Rht-dp was performed by using SLAF-Seq-BSA and SSR markers, with cloning and analysis in 56 tetraploid wheat. The main results are shown below: 1. Statistical analysis of plant height of the DPW×HPW F2 (850 indivduals): Rht-dp is a single gene. 2. SLAF-Seq analysis of DPW×HPW F7 RILs, Rht-dp was mapped on the 4B chromosome started from 154,766,751 to 343,858,300. 3. 13 pairs of polymorphic SSR markers were screened in the initial location, and linkage analysis revealed that 12 individuals did not linked to all ma