鼠伤寒沙门菌减毒株△arcA△fnr△fliC的构建与疫苗潜力评价.pdfVIP

摘 要 沙门菌可以引发多种动物的胃肠道疾病，给养殖业和公共卫生造成重大威胁。随 着抗生素耐药问题日益严重，研制高效的新型减毒疫苗是必要的。本研究通过自杀质 粒介导的同源重组的方法，构建了一株鼠伤寒沙门菌∆arcA∆fnr∆fliC减毒株，并在小 鼠模型上评估了它的免疫原性和保护效果。 1 鼠伤寒沙门菌突变株的构建和鉴定 本研究以鼠伤寒沙门菌ATCC14028为基础菌株，以调控基因arcA、fnr 及鞭毛 蛋白基因fliC为靶基因，通过自杀质粒介导的同源重组的方法构建了单基因突变株 ∆arcA、∆fnr、∆fliC、双基因突变株∆arcAΔfnr 和三基因突变株ΔarcAΔfnrΔfliC。经PCR 鉴定靶基因被成功缺失。利用甲苯胺蓝固体培养基、M9低盐固体培养基及半固体LB 培养基对各突变株的生长状况、泳动能力进行鉴定，结果证实，arcA、fnr 突变导致 菌株在相应平板上的生长受限以及fliC突变导致菌株运动能力显著下降，这表明各突 变株被成功构建。 2 鼠伤寒沙门菌突变株部分生物学特性及毒力测定 本研究对所构建的五株突变株进行部分生物学特性及毒力测定。结果显示，各突 变株的体外生长曲线与野生株相似。arcA、fnr、fliC基因缺失会使细菌丧失运动能力，