医学免疫学：免疫学检测.pptVIP

免疫学检测技术 诊断疾病、研究发病机制、监测病情、评价疗效 测抗原、抗体； 免疫细胞数目、功能 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素 一、抗原抗体反应的特点 高度特异性 抗原抗体结合具有可逆性 抗原与抗体比例合适 抗原抗体反应的2个阶段： 1.高度特异性 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 静电引力 范德华引力 氢键 疏水作用力 抗原抗体结合力示意图 2.抗原抗体的可逆结合 抗原抗体结合力 可逆性:抗原抗体为分子表面的非共价结合， 形成的复合物不牢固，一定条件下可解离为 游离抗原和抗体。 抗原抗体反应的可逆性 抗体分子一个抗原结合部位与一个相应抗原表位之间的结合强度 ，取决于二者空间构型互补的程度 亲和力(affinity) 抗原抗体的亲和性示意图 Ag-Ab结合的带现象 适宜的浓度和比例 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象 抗原抗体反应的阶段性 二、AgAb反应的影响因素 AgAb浓度与比例——影响最大 电解质 0.85％NaCl 温度 37℃ 酸碱度 PH6～8 抗原抗体反应的类型 凝集反应（agglutination reaction) 沉淀反应(precipitation reaction) 免疫标记技术 （一）凝集反应(agglutination)? －－颗粒性Ag 与相应 Ab结合后，出现肉眼可见 的凝集物。? 直接凝集反应??? 颗粒性Ag直接与待检Ab，反应出现的凝集现象。 玻片法 如: ABO血型鉴定 单向免疫扩散(singlel agar immunodiffusion) 双向免疫扩散(double agar immunodiffusion) （二）沉淀反应 可溶性Ag 加相应Ab在电介质参与下，出现沉淀物。 原理示意图 Ab Ag 模拟图 染色标本图 1.抗原抗体双向自由扩散 2.24小时出结果 3.呈现沉淀线或弧 免疫标记技术 按检测现象分为: ①放射免疫技术 ②荧光免疫技术 ③酶免疫技术 ④化学发光免疫技术 ④金免疫技术 用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标 记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记 物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析 荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明（红色荧光） 放射性同位素： 125I、131I 酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶 免疫荧光检测法（IFA） 放射免疫检测法（RIA） 酶免疫检测法（EIA） 免疫标记技术 1. 酶免疫测定法(enzyme immunoassay，EIA) ??? 原理: 酶催化底物的高效性与Ag-Ab反应的特异性相结合，催化酶底物显色，判断结果。既可定性也可定量，其敏感度高。 (ng-pg/ml) 标记酶: (HRP)；底物:邻苯二胺(OPD)， 二氨基联苯胺(DAB)。 酶联免疫吸附实验， 是应用酶标记的抗体（或抗原）在固相支持物表面检测未知抗原 （或抗体）的方法。 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)??? 待测A 待测 B 待测 C 底物 显色:颜色的深浅与血清中抗体的量 成正比 包被乙肝 Ag 一抗: 人抗病毒抗体(IgG) 二抗: 羊抗人IgG抗体-辣根过氧化物酶 酶联免疫吸附试验（ELISA） 金标记 * *