白细胞分离技术汇总.pdfVIP

外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、 单核细胞淋巴细胞等分离液） 1 取3ml 正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs 混匀后小 心的加于6ml 白细胞分离液液面上，1500r/min 离心20 min。（或 先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs 然后小 心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上） 2 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS 后3000 r/min 离心10 min。 3 弃上清，加 1ml PBS 洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至 1.5mLEp 管中。 4 3000r/min 离心20 min，弃上清。 即得白细胞 可以试试红细胞裂解液 提供我的配方： 氯化铵82.9 克；重碳酸钾10.0 克；EDTA0.37 克；用三蒸水配成1 升 所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则 2.分层后的确有3 层，准确说来是4 层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也 比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清 3.细节： a.淋巴细胞分离液要避光保存 b.就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的 c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操 作，切不可混匀 d.所有操作都应在无菌环境