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高效液相色谱 一 . 简介 仪器型号： Agilent 1200 HPLC 高效液相色谱 仪器厂商：美国安捷伦公司 仪器性能： 流速范围： 0.001~5.0mL/min, 0.001mL/min 步进；压力范围： 0-40MPa(0-400bar,0-5880psi) ；梯度组成精密度： 0.15%SD （ 1mL/min ）。 可测项目：可用于痕量分析，其检测限为 ppb～ ppm 级。 样品要求：样品一般需预处理。 每个新来的同学， 请先在 D 盘建立自己的文件夹， 文件夹里再包括方法、 夹，并在 view-preferences 里增加自己的路径。 二、实验步骤  数据和序列三个子文件 开 机 将待测样品按要求前处理，准备 HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。 开机。打开电脑、 HPLC 各组件电源。 3) 打开软件（联机） ，配置仪器 （配置 1200 系统模块，根据需要配置，检测器选择如 VWD 或 DAD ） 打开工作界面， 按操作要求赶流动相气泡。 （排气：逆时针旋松 “ Purge”阀，软件上点击 “ Pump” 图标，点击 “Setup pump”选项，进入泵编辑画面， 设 Flow ：5mL/min ，点击 “OK”。 点击 “ Pump” 图标，点击 “Pumpcontrol ”选项，选中 “On”，点击 “OK”，则系统开始 Purge，要求赶 10min ， 到无气泡为止。 切换通道（ A-B-C-D ）继续 Purge，直到所有要用通道无气泡为止。 点击 “Pump” 图标，点击 “Setup pump”选项，设Flow ：1.0或1.5mL/min 。点击 “Pump”图标，点击 “Pump Control ” 选项，选中 “Off ，”点击 “Ok”关泵，顺时针拧紧 Purge valve 。 ） 5) 建立清洗、平衡柱子分析方法（这步也可在脱机软件上完成） 编辑方法及样品分析  ，保存并运行。 方法信息： 从 “ Method菜”单中选择 “ Edit entire method 项，选”中除 “ Dataanalysis 外的三”项，点击 “Ok”，进入下一画面。在 “Method Comments”中写入方法的信息。点击 “Ok” 进入下一 画面。（联机或脱机情况下，可以直接编辑方法所需的模块，然后方法另存为 ...） 2) 自动进样器参数设定 ：选择合适的进样方式 , “Standard Injection ”---- 只能输入进样体积， 此方 式无洗针功能。 “Injection with Needle Wash”---- 可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从 样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injectorprogram ---”可以点击 “Edit ”键进行进样程 序编辑。点击 “Ok”进入下一画面。 3) 泵参数设定： （以四元泵为例）在 “ Flow”处输入流量，如 1.5ml/min ， “ Solvent B处输”入 70， (A=100-B-C-D) ，可 Insert 一行 ”Timetable ”，编辑梯度。在 “ Pressure LimitsMax 处输入”柱子 的最大耐高压，以保护柱子。点击 “Ok”进入下一画面。 4) 柱温箱参数设定 ：在 ”Temperature”下面的空白方框内输入所需温度， 并选中它， 点 more查看， 保证左右两边柱温箱温度一致。 VWD 检测器参数设定：检测波长：一般选择最大吸收处的波长。 6) DAD 检测器参数设定：检测波长：一 般选择最大吸收处的波长。 样品带宽 BW ： 一般选择 最大吸收值一半处的整个宽度。 参比波长 ：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区 域 。 参比带宽 BW ：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用 100nm作为缺省值。 Peak width （ Response time）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。 Slit- 狭缝窄，光谱分辨率高；宽 时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。 FLD 检测器参数设定 : Excitation A: 激发波长 :200-700nm ，步长为 1nm，或 Zero Order 。Emission: 发射波长 : 280-900nm ，步长为 1nm，或 Zero Order 。同时可以输入范围 Range、步长 step、采 集光谱。 （联机或脱机情况下，可以直接编辑方法所需的以上各模块，然后方法另存为 ...） 新建序列： 在菜单中点击新建序列， 在序列参数中输入样品信息， 在序列表中输入样品位置，方法等，保存序列。 序列参数设置：设置数据储存路径