生物分离技术层析技术.pptxVIP

2.10 层析技术;2.10.1 历史和概念——层析Chromatography;层析技术的发展历程;概念;;吸附剂对有机物的吸附作用有多种形式。 例如以氧化铝作为固定相时，非极性或弱极性有机物只有范德华力与固定相作用，吸附较弱；极性有机物同固定相之间可能有偶极力或氢键作用，有时还有成盐作用。这些作用的强度依次为： 成盐作用 配位作用 氢键作用 偶极作用 范德华力作用 有机物的极性越强，在氧化铝上的吸附越强。;石油醚 环己烷 四氯化碳 苯 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 ??酮 吡啶 乙醇 甲醇 水 乙酸;根据层析分离机制;2.10.3 各种层析技术——吸附层析;;;吸附层析代表之一 —— 活性炭层析;;;;;吸附层析代表之二 —— 氧化铝柱层析;;用氧化铝柱分离长春碱和长春新碱的范例;;;通常所说的硅胶层析之一为吸附硅胶层析，载体硅胶具有多孔性的硅氧环（mSiO2·nH2O）。 硅醇基显较弱的酸性。 在甲醇和水中溶解度为0.01%，pH大于9时溶解度急剧上升。;;干装和湿装 干装时，先在柱底塞上少许玻璃纤维，再加入一些细粒石英砂，然后将准备好的吸附剂用漏斗慢慢加入干燥的色谱柱中，边加入边敲击柱身，务必使吸附剂装填均匀，不能有空隙。吸附剂用量应是被分离混合物量的30～40倍，必要时可多达100倍。加够以后，在吸附剂上覆盖少许石英砂。 湿装时，将准备好的吸附剂用适量展开剂调成可流动的糊，如干装时一样准备好色谱柱，将吸附剂糊小心地慢慢加入柱中（提前放一半柱体积的展开剂），加入时不停敲击柱身，务必使吸附剂装填均匀，不能有气泡和裂隙，还必须使吸附剂始终被展开剂覆盖。;2）洗柱;3）上样和洗脱;正确选择层析柱，正确使用层析柱;;;;吸附层析代表之四 ——大孔吸附树脂;CD180?丙烯酸系??用于提取分离丁胺卡那霉素等氨基糖苷类半合成抗生素860021?苯乙烯系??主要用于甜菊糖苷、人参皂苷的提取精制，有机物的分离LK-002?脲醛系列??主要用于银杏黄酮、山楂黄酮、大豆异黄酮等的吸附提取LK-001?乙烯吡啶??主要用于甜菊糖甙等的吸附提取DM131 改进型树脂??苯乙烯系??主要用于银杏黄酮、人参皂甙、茶多酚等物的天然药提取和精制，具有吸附量大、二乙烯苯残留量低的优点，符合FDA的药用要求;;大孔吸附树脂应用举例;巯基纤维素;;巯基纤维素的应用举例;还有哪些吸附材料？;2.10.4 分配层析;分配层析之一 —— 纸层析;上行法;下行法;滤纸的选用对纸层析的影响;双向纸层析;薄层层析技术;;;;;;;薄层层析优点;⑤流动相的更换方便，各种多元混合溶剂皆可选作展开剂，比高效被相色谱法所能选用的溶剂的范围宽。可充分利用样品中各组分在多元混合溶剂中的分配系数差异，实现高效率分离。一个普通TLC理论板数可达到几百块，有利于一些复杂样品的分离。 ⑥展开操作技术丰富多样，如双向展开、圆形展开、多次展开、旋转展开等，以适用于各种复杂体系样品的分离与制备。 ;薄层色谱法缺点;吸附剂的选择;氧化铝;聚酰胺（腈纶、尼龙）;;;;;展开剂的选择方法; A组分通常为展开剂中极性小，比例大，它对样品不溶或微溶，在展开剂中主要是对样品起 “输送剂”的作用。如单独使用，不能使样品的斑点移动。 B组分极性比A组分大，能使样品中各组分充分溶解，在展开过程中起“分配剂”作用。 C组分的极性介于A与B溶剂之间，是展开剂的“极性调节剂”，使A和B能够互溶。 ;D组分是为改进样品中某些极性特别大的组分在展开中斑点拖尾或在原点不动，而加入强极性溶剂，如酸、碱等。其作用主要是“薄板的活性调节剂”。在展开剂中，D组分占的比例较小，必须严格控制加入量的准确性。;点样与展开;;;薄层层析的定位 对展开后的薄板进行定性与定量分析的前提是确认板上各组分的色班或色带的位置，通常称显色。常用的显色方法有紫外－荧光法、蒸气显色法和化学显色法等。;薄层色谱显色剂;;;薄层层析的定性 ;薄层色谱定量分析 （1）溶剂洗脱—分光光度测定法，方法的误差在5％以内，已成为国内外许多工业产品质量控制的标准化方法。 （2）在板上原位直接定量测定法。即测定斑点的面积法，误差较大，一般10％－15％之间；或测定斑点光密度法，误差较小，一般5－10％。;薄层层析在天然药物化学中的应用;应用举例：文字色料的薄层色谱检验;圆珠笔油的染料成分检验;;分配层析之——反相硅胶层析;C18、 C8 、 ODS、ODS2、RP18填料 ;ODS填料选择指南;;;;;;2.10.5 离子交换层析;;样品;2.10.6 凝胶层析和亲和层析;具有专一性亲和力的生物分子对： 酶—底物（包括酶的竞争性抑制剂和辅