基因工程的原理和技术47692.pptxVIP

restriction endonucleaseDNA linking-enzymeDNA linking-enzyme利用基因工程原理让大肠杆菌生产人胰岛素又需要哪些基本操作步骤呢？质粒胰岛素基因第二节 基因工程的原理和技术大肠杆菌随细菌的增殖，胰岛素基因也同时复制获取目的基因导入受体细胞人体细胞形成重组DNA分子 大肠杆菌目的基因检测与鉴定获取胰岛素基因的表达产物－胰岛素胰岛素基因工程（将人胰岛素基因转入大肠杆菌）剪切（二）形成重组DNA分子（三）将重组DNA分子导入受体细胞（一）获得目的基因（四）目的基因的检测和表达拼接导入表达基因工程的基本操作步骤（技术）1、筛选含有目的基因的受体细胞2、目的基因的表达问题：获取目的基因的方法有哪些？思考1：如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，比如:如果我们对抗虫基因的碱基序列完全不知道，怎样从苏云金芽孢杆菌体内获取目的基因（抗虫基因）？ 如何操作？ 基因组文库例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因大片段DNA目的基因如果运气不好，在打成小片段时，有可能把抗虫基因打断……打成许多小片段小片段DNA载入运载体重组DNA分子重组DNA分子细菌例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因对基因组文库的所有细菌进行逐一筛查找出有抗虫蛋白的菌落该菌落所携带的基因片段就含有目的基因如何从基因文库中获取目的基因?大片段DNA目的基因打成许多小片段小片段DNA载入运载体重组DNA分子重组DNA分子容易吗？基因组文库细菌构建基因组文库，获取目的基因一.基因工程的基本操作步骤（技术）(一)获得目的基因1.从基因文库中获取形成重组DNA分子DNA片段构建基因组文库生物材料提取限制酶受体菌群体DNA导入思考：从基因组文库中获取人的胰岛素基因，导入大肠杆菌能否成功表达？为什么？思考：能否根据mRNA合成没有内含子的胰岛素基因？RNA链DNA链逆（反）转录法合成目的基因：逆转录酶核酸酶HDNA聚合酶水解RNA单链RNA（mRNA)杂交双链单链DNA双链DNA cDNA文库的构建提取逆(反）转录一.基因工程的基本操作步骤（技术）(一)获得目的基因1.从基因文库中获取形成重组DNA分子DNA片段构建基因组文库生物材料提取限制酶受体菌群体DNA导入形成重组DNA分子构建cDNA文库目的基因(cDNA)受体菌群体mRNA导入思考：基因文库如同国家图书馆，而cDNA文库则像某单位的图书馆，二者除了大小不同之外，还有哪些区别？ 文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子基因中终止子基因多少小大 有无有无 全部基因部分基因思考： 如果想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，需要构建哪一种基因文库？问题：获取目的基因的方法有哪些？思考1：如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，怎样办？如何操作？思考2：如果我们已知目的基因的碱基序列，可以怎样操作？ 一.基因工程的基本操作步骤（技术）(一)获得目的基因1.从基因文库中获取形成重组DNA分子DNA片段构建基因组文库生物材料提取限制酶受体菌群体DNA导入提取形成重组DNA分子构建cDNA文库目的基因(cDNA)反转录受体菌群体mRNA导入2.化学合成法目的基因的核苷酸序列是已知 化学合成法目的基因问题：获取目的基因的方法有哪些？思考1：如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，怎样办？如何操作？思考2：如果我们已知目的基因的碱基序列，可以怎样操作？思考3： 如果我们已知蛋白质的氨基酸序列，又可以怎样操作？ 思考：能否根据氨基酸的序列获得人胰岛素基因的碱基序列？化学合成法一.基因工程的基本操作步骤（技术）(一)获得目的基因1.从基因文库中获取形成重组DNA分子DNA片段构建基因组文库生物材料提取限制酶受体菌群体DNA导入提取形成重组DNA分子构建cDNA文库目的基因(cDNA)反转录受体菌群体mRNA导入2.化学合成法目的基因的核苷酸序列是已知 化学合成法目的基因或可推测的问题：获取目的基因的方法有哪些？思考1：如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，怎样办？如何操作？思考2：如果我们已知目的基因的碱基序列，可以怎样操作？思考3： 如果我们已知蛋白质的氨基酸序列，又可以怎样操作？思考4：如果我们知道目的基因两端的部分碱基序列，还可以怎样操作？ 聚合酶链式反应（pcrdhPCR.swfPCR技术）变性：双链DNA解链成为单链DNA复性（退火）：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链双链DNA单链DNAPCR技术与原理3.延伸升温至72℃2.复性降温至60℃1.变性升温至95℃DNA聚合酶引物与母链结合解旋Taq DNA聚合酶有耐高温的特点思考：PCR技术扩增目的基因，需要什么前提和条件？过程如何？原