突破衍射极限的超高分辨率成像关键技术发展.docVIP

结课论文 题 目 突破衍射极限超高分辨率成像技术进展 学生姓名 学 号 学 院 专 业 班 级 二〇一五年十二月  一 引言 选题意义 光学显微成像含有极为悠久历史，但一直以来，光学成像一直受到衍射极限限制而分辨率无法突破200 nm。以后即使有了电子显微镜、核磁共振显像、x光衍射仪等微观观察或显像设备，不过使用光学显微镜能够在活体状态下观察生命体使得其在生物、医学观察方面仍有巨大优势。值得庆贺是多年来，超高分辨率显微技术发展使得光学显微成像分辨率达成了20 nm以下。其中德国科学家Stefan Hell、美国科学家Eric Betzig和William Moerner因其在超高分辨率显微技术方面突出贡献取得了20XX年诺贝尔化学奖。在这篇文章中，我们就简明介绍一下超高分辨率显微技术发展和应用，并对诸位大师致以敬意。 技术指标 显微技术成像优劣通常经过X-Y平面分辨率和Z轴分辨率大小来判定，分辨率越高数值越小。下表是多种显微成像技术分辨率指标。 成像技术 X-Y平面分辨率（nm） Z轴分辨率(nm) 一般光学显微镜 200-300 500-700 4Pi显微镜 100-150 STED显微技术 50-70 STED+4π技术 50 50 PALM技术 20 30 3D STORM技术 20-30 50-60 dSTORM技术 30 50 2D SSIM技术 50 3D SSIM技术 100 200 电子显微镜 0.05 X光衍射仪 0.03-10  二 衍射极限 2.1 衍射极限 我们能看到什么？看到多小范围？看得有多清楚？几百年来，依靠不停进步科学手段，微观世界正一层层揭开面纱，让大家能够看得越来越“小”，进而能够进行研究。 人肉眼能分辨0.1毫米尺度物体，再小，就要借助工具。1665年，英国科学家罗伯特·虎克制造了第一台用于科学研究光学显微镜，用它观察薄薄软木塞切片。虎克看到了残余植物细胞壁，它们一个个像小房间一样紧挨在一起，这就是“细胞”一词由来。 以后，显微镜制造和显微观察技术快速发展，帮助科学家第一次发觉了细菌和微生物。那么，光学显微镜是否能够无止境地“放大”下去，让我们想看到多小就能看到多小？科学家为此做了很多尝试，最终发觉，存在一道法逾越“墙”—衍射极限。 1873年，德国科学家阿贝提出了衍射极限理论：光是一个电磁波，因为存在衍射，一个被观察点经过光学系统成像后，不可能得到理想点，而是一个衍射像，每个物点就像一个弥散斑，假如这两个点靠得很近，弥散斑就叠加在一起，我们看到就是一团模糊图像。 阿贝提出，分辨率极限近似于入射光波长二分之一(d=λ/2)。可见光波长通常在380~780纳米之间，依据衍射极限公式，光学显微镜分辨率极限就在200纳米（0.2微米）左右。假如物体小于0.2微米，你依旧看到是一个模糊光斑。这就是很长一段时间内，光学显微镜分辨极限——衍射极限。 2.2 突破衍射极限 为了更深入观察世界，以后有了电子显微镜、核磁共振显像、x光衍射仪等微观观察或显像设备，大家借助它们能够看得更“细”。不过这些设备仍然没有突破衍射极限，她们仍然遵照着阿贝衍射极限。这些设备使用是电子束等波长很短入射光，自然，它们分辨率就高。比如电子显微镜，分辨率能够达成0.5埃（一埃等于十分之一纳米），这么就能够看到一粒一粒原子。 因为生物学、医学方面研究，更期望在生命体存活自然状态下进行观察，在这方面，光学显微镜有它不可比拟优势。所以，光学显微镜研发还是世界科学家研究热点。突破性进展发生在本世纪初，多年来，伴随新荧光探针和成像理论出现，研究者开发了多个实现超出一般共聚焦显微镜分辨率三维超分辨率成像方法。较成熟有基于单分子成像超分辨率显微成像方法，包含光激活定位显微技术 (photoactivated localization microscopy, PALM) 和随机光学重构显微技术 (stochastic optical reconstruction microscopy, STORM)。和两大类经过改造光源点扩散函数来提升成像分辨率方法，分别是受激发射损耗显微技术(stimulated emission depletion, STED)和饱和结构照显著微技术。 (参考文件：吕志坚，陆敬泽.多个超分辨率荧光显微技术原理和近期进展) 以上这些进展,全部让光学显微镜突破了衍射极限，我们称之为“超分辨成像技术”。美国光学学会把它列为二十一世纪光学五大研究计划之首。  三 超高分辨率显微技术 3.1光激活定位显微技术PALM 当显微镜需要分辨两个或更多点光源时候，极难突破光学分辨率极限来进行正确定位．而当显微镜物镜视野下仅有单个荧光分子时候，经过特定算法拟合，此荧光分子位置精度