工作细胞库(WCB)制备.doc

工作细胞库（WCB）制备 1. 根据SOP，提供工作细胞库（WCB，冻干管）制备的工艺过程与中间控制的描述资料，必要时对SOP修订或补充。工作细胞库由主细胞库（MCB）制备。 工艺过程如下： 上一年留存冻干管（主细胞库） ↓ 制备若干斜面 ↓ 摇瓶发酵水平测定 ↓ 　　　　　　　　　　　　 选定满意的斜面 ↓ 　　　　　制备冻干管（今年的工作细胞库） 在制备主细胞库过程中，制备的斜面在温度３４℃、湿度４０％～５０％的培养箱中培养７天。检测发酵水平时，摇瓶于３２±１℃的摇床上培养８天。对于选定的斜面，其化学效价应和上一年主细胞库效价的差距 2. 参照ICH Q5D和EP中“PRODUCTS FO FERMENTATION”的要求，提供现有主细胞库鉴别、纯度和生产能力的数据，并与历史数据比较，提供由此主细胞库制备的工作细胞库的鉴别、纯度和生产能力的数据，并与主细胞库比较。 主细胞库的稳定性包括鉴别、纯度和生产能力的检测。 利用16S rRNA测定菌种的基因序列来进行MCB的鉴别。和已知基因序列相比，如果两者相同比率≥98%，则说明MCB没有发生变异。 利用平板菌落分离来检测菌种的纯度。如果分离平板中没有1个杂菌菌落生长，则说明MCB没有受到其它菌种的污染。 利用摇瓶发酵来检测MCB的生产能力。将菌种接种到发酵瓶后，在32±1℃培养8天，如果与去年主细胞库效价差距≤5%，则说明MCB 主细胞库以冻干管形式保存于2~6℃ 在工作细胞库方面： 菌种鉴别主要靠肉眼观察和显微镜观察来进行。肉眼观察成熟单菌落，菌落具有一定的花瓣形状，边缘不规则，中间隆起，且颜色偏灰。将菌种接种到摇瓶并且培养，用显微镜观察菌丝，发现菌丝微直，呈一定放射状，和分枝菌丝一起构成网状。 和MCB一样，利用平板菌落分离来检测WCB的纯度。如果分离平板中没有1个杂菌菌落生长，则说明WCB没有受到其它菌种的污染。 利用摇瓶发酵来检测菌种的生产能力。将菌种接种到发酵瓶后，在32±1℃培养8天，如果和制备工作细胞库的主细胞库效价差距≤5%，则说明WCB 工作细胞库以冻干管形式保存于2~6℃