Sephadex LH-20水分离系统的原理及应用.pdfVIP

2008-5 Volume 7 凝 胶 过 滤 填 料 凝胶过滤，或尺寸排阻，是一种简单、高效的层析方法，用于蛋白或生物大分子的纯化。但是， 大多数凝胶过滤填料都只能在低流速下使用，且分辨率十分有限，因而，很难实现高通量的大规模的 制备工作。 Cellufine GCL-2000，一种球 形纤维素基的凝胶过滤填料，克 服了传统凝胶过滤填料的缺陷， 机械稳定性良好，分辨率高，因 而，可在高流速下使用，更可用 于大规模工业化柱的装填和操作。 Cellufine GCL-2000，可用于 分离分子量范围分布很宽的复杂 组分，特别适合于高分子量蛋白 复合体的组分分离。 Cellufine GH-25，一种多孔的球形高交联度纤维素基凝胶过滤填料，可用于蛋白的快速除盐。3kD 的排阻极限使得蛋白等大分子可以直接通过柱体，而小分子的盐类溶解物在通过柱体的同时，则还需 经过填料内部的孔隙，滞后了洗脱的时间，从而达到了蛋白和盐类溶解物的分离。Cellufine GH-25， 具有良好的机械稳定性，因而可在高流速下使用，不仅可用于装填大直径的制备柱，而且还大大减少 了蛋白制备所需的时间。 填充物：Cellufine GH-25 样品体积：1272 ml (25 %柱体积) 柱体积：105 x 587 mm Vt = 5086 ml 盐去除率：99 % 流动相：0.1M NaCl 蛋白收率：99.5 % 流 速：1250 ml/min, 870 ml/h/cm2 稀释倍数：1.13x 样 品：5 % (w/v BSA) in 1.5M NaCl 2008-5 Volume 7 默 克 薄 层 板 TCL 产品及应用 按照涂层种类来分，默克的TCL 板有以下五种： 1．Sillica gel 60 以及Sillica gel 60 F254 ，此为 加热的情况下形成了发蓝色荧光的加合物）。 硅胶板，TCL 中超过 90%的应用是硅胶板； CN 板越来越多地用于正相分离，使用正己烷 其中 60 代表涂层的硅胶孔径为 60；F254 表示 和极性有机改性剂作展开剂；同时，CN 板也 涂层中含有荧光指示剂，此荧光指示剂在 可以用于反相色谱分离。 254nm 紫外光下发射绿光；此外，默克还有标 3 ．Cellulose (F)，纤维素板，适合于分离强极 识为F254S 的薄层板，它在254nm 紫外光下发 性的化合物如儿茶酚，食物色素以及氨基酸。 射蓝光。 4 ．Aluminum Oxide ，氧化铝板，默克提供碱性 2 ．改性硅胶板，RP-8，RP-18，NH ，CN ， 和中性氧化铝板，所有的玻璃板全部为碱性氧 2 DIOL 。 化铝板，酸性氧化铝板可以通过使用酸性展开 RP-8 ，RP-18 是反相薄层板，其色谱行为和 剂用中性氧化铝板制备。 HPLC 的反相填料相近。但是在使用普通的反 5 ．Polyamide ，聚酰胺薄层板。 相TLC 板时，展开剂中的水含量不得超过40% 按薄层板的基材来分可以分为玻璃板，铝板和 （这是由于发生毛细作用的填料孔的润湿性 塑料板，其中铝板由于其方便裁剪，价格便宜 有限）；如果需要更高的水含量作展开剂，需 赢得用户的青睐。 要选择RP-18W 的反相薄层板，这种涂层具有 按薄层板涂层厚度来分，也可以说是按照分离 低的键合度，涂层表面有更多的残余硅羟基。 的目的来分类，可以分为普通板（