核酸检测技术及质量控制(王凤鸣)[参照].ppt

理想的PCR实验室分区设计模式 产物分析区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 缓冲间 缓冲间 专用走廊 工作流向 扩增区 标本制备区 试剂准备区 各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作 “十六字口诀” PCR实验室设计的一般原则 * 精品ppt·实用借鉴 标本处理与核酸提取的质量控制 核酸提取试剂的选择 核酸扩增试剂的选择 试剂的分装保存 试剂的配置 对照的设立 核酸扩增仪器 扩增参数的设定 * 精品ppt·实用借鉴 扩增产物的检测与分析 荧光定量 普通凝胶电泳 毛细管电泳 * 精品ppt·实用借鉴 污染的控制和预防 常见污染的来源 控制污染的措施 消除污染的措施 * 精品ppt·实用借鉴 三、实验室生物安全管理 * 精品ppt·实用借鉴 为什么关注实验室生物安全？ 三起SARS疫情后期的实验室感染事件 2003年9月8日：新加坡国立大学实验室，在P3实验室同时开展西尼罗病毒与SARS病毒的研究，一位27岁华人研究员感染； 2003年12月6日：台湾省国防大学预防医学研究所，一名47岁的中校研究员，在P3实验室内清理SARS实验后的废弃物时，未戴手套，因而感染； 2004年4月22日：中国CDC病毒所，跨室开展SARS病毒研究，并引发三代、9例 病例、1例死亡；另有两例 “隐性”感染者。 * 精品ppt·实用借鉴 引起实验室生物污染的原因很多很多 人员生物安全概念薄弱和技术操作不当； 生物安全柜和高压灭菌容器的不正常使用或使用不当； 样品传递、接受和使用、装有冻干感染性物质安瓿的打开； 匀浆器、组织研磨器、摇床、搅拌器和超声处理器的使用； 离心机内装有潜在感染性物质的离心管发生破裂 * 精品ppt·实用借鉴 生物安全的概念 实验室生物安全 避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。 生物安全三个方面： 一指人类的健康安全；二指人类赖以生存的农业生物安全；三指与人类生存有关的环境生物安全。 * 精品ppt·实用借鉴 微生物实验室生物安全 三项技术措施 样品隔离技术（机械、气幕)：防止传染因子进入环境接触人体 定向气流技术（负压系统)：防止传染因子扩散 消毒灭菌技术（物理、化学)：灭活传染因子 * 精品ppt·实用借鉴 实验室可以分为 基础实验室 —— 一级生物安全水平 基础实验室 —— 二级生物安全水平 防护实验室 —— 三级生物安全水平 最高防护实验室 —— 四级生物安全水平 根据操作不同危险度等级微生物所需的实验室设计特点、建筑构造、防护设施、仪器、操作以及操作程序来决定实验室的生物安全水平。 * 精品ppt·实用借鉴 实验室生物安全防护屏障 一级防护屏障 生物安全柜和个人防护装备等构成的防护屏障。 * 精品ppt·实用借鉴 生物安全柜 高效空气过滤器 。 * 精品ppt·实用借鉴 * 精品ppt·实用借鉴 * 精品ppt·实用借鉴 * 精品ppt·实用借鉴 实验室生物安全防护屏障 二级防护屏障 设施结构和通风系统等构成的防护屏障。 “盒中盒”的结构 * 精品ppt·实用借鉴 实验室生物安全防护水平分级 生物安全水平分级 根据生物因子危害程度和采取的防护措施，将生物安全防护水平（biosafety level，BSL）分为4级（BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示）；动物实验室以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示。 * 精品ppt·实用借鉴 与一般生物洁净室的区别 1.工作目的 BSL实验室： 保护工作人员和环境为主，也保护产品。安全是首要考虑因素。 生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首要考虑因素 2.污染物的种类和来源 BSL实验室：为目标微生物。内部产生。 生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入以及人的活动产生。 * 精品ppt·实用借鉴 * 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 精品ppt·实用借鉴 核酸检测技术及质量控制 常州市疾病预防控制中心 王凤鸣 * 精品ppt·实用借鉴 目 录 一、PCR实验技术操作要点 二、质量控制要点 三、实验室生物安全管理 * 精品ppt·实用借鉴 一、PCR实验技术操作要点 * 精品ppt·实用借鉴 常用仪器设备 * 精品ppt·实用借鉴 加样器 PCR实验室应备有4套连续可调加样器，分别用于试剂准备、样本处理、扩增和产物检测四个试验区。 * 精品ppt·实用借鉴 加样器的类型 单道连续可调式移液器 多通道连续可调式移液器 单道连续移液器 单道移液管配合使用的移液器 * 精品ppt