褐家鼠抗药靶基因多态性及诱导抗性在世代间传递特点.pdfVIP

摘 要 抗凝血灭鼠剂是世界上广泛使用的一类化学灭鼠剂，但鼠类很容易对其产生抗性。抗药靶基 因Vkorc1 （维生素K 环氧化物还原酶复合体，亚单位1 基因）上的突变是鼠类抗性产生的主要机 制，也是鼠类抗性检测的主要分子标记。已有数据显示，我国在用药 30 多年后褐家鼠中已经出 现抗性，2010 年湛江种群的抗性率达2 1.6% 。然而，目前关于我国褐家鼠的 Vkorc1 多态性的研 究都还是空白。另外，虽然 Vkorc1 突变是鼠类产生杀鼠灵抗性的主要机制，但有研究发现个别 抗性鼠并不携带 Vkorc1 抗性突变，表明还存在其他未知的抗性产生机制。基于以上问题和研究 现状，本论文对我国褐家鼠的 Vkorc1 多态性进行了大范围多种群的调查，并利用实验室不携带 Vkorc1 抗性突变的敏感鼠探索其他的抗性机制，具体从以下四个方面展开研究： 1. 重点分析了湛江和哈尔滨2008~2015 年连续8 年的641 只褐家鼠Vkorc1 多态性及其与抗 性的相关性。结果显示，共存在3 种新突变，包括 1 种氨基酸突变Ala140Thr （频率为0~4.0% ） 和2 种同义突变His68His 、Leu105Leu ；哈尔滨和湛江种群生理抗性率分别为0%和5~17%，试验 种群中检测到的突变His68His 、Ile105Ile 与抗性没有相关性。Vkorc1 多态性和生理抗性检测的结 果都支持两地褐家鼠种群抗性水平低。 2. 分析了来自我国24 个省的491 只褐家鼠Vkorc1 多态性。结果显示，仅在广东湛江和河 北保定发现可能与抗性相关的氨基酸突变Ala140Thr 和Cys96Tyr ，说明我国大多数地区褐家鼠种 群的抗性率比较低。欧洲褐家鼠至少携带9 种不同的抗性突变，基因流分析结果支持褐家鼠种群 从我国北部扩散到东南亚，然后快速扩散到欧洲，说明这9 种抗性突变不是随种群扩散的古老多 态性，更像是种群扩散到欧洲后独立起源。 3. 为了探索抗性产生的其它可能机制，利用亚致死剂量的杀鼠灵逐代筛选实验室敏感褐家 鼠 （sF0 代；不携带抗性 Vkorc1 突变）。经过连续6 代 （sF0~sF5 ）筛选，存活率逐代提高，并且 5.7~7.1% 的sF3~sF5 代表现出明显的抗性表型，说明褐家鼠的抗性可以被诱导，并传递给后代成 功建立了耐药褐家鼠模型。 4. 比较分析了敏感鼠 （uF5 ）、耐药鼠 （sF5 ）和杀鼠灵刺激后的强耐药鼠 （sF5R ）的肝脏转 录组。结果显示，耐药鼠与敏感鼠相比，先天免疫相关基因的差异表达提高了其耐药本底；强耐 药鼠与耐药鼠相比，在受到杀鼠灵刺激后，耐药雌鼠中药物代谢、解毒、凝血、创伤愈合等多个 生理过程的基因表达会发生显著变化，耐药雄鼠则通过改变蛋白质和脂质等多个代谢途径的基因 表达间接应对，初步阐明了可塑性耐药表型的分子调控机制。 综上所述，本论文发现我国褐家鼠缺乏靶基因 Vkorc1 抗性突变，大多数地区褐家鼠种群的 抗性水平较低，低毒的第一代抗凝血类灭鼠剂对我国的褐家鼠种群仍然有效。通过亚致死剂量杀 鼠灵逐代诱导敏感褐家鼠建立了不依赖于 Vkorc1 突变的耐药种群，并发现这种耐药性的提高与 先天免疫相关基因的差异表达有关，但具体发挥作用的方式仍需要进一步的实验进行功能验证。 关键词：抗凝血灭鼠剂，抗性，褐家鼠，Vkorc1，表型可塑 I Abstract The anticoagulant rodenticides have been widely used for rodent control all over the world. Anticoagulant resistance has evolved in different rodent species and arisen as a big challenge in practical usage of anticoagulants. The main mechanism of warfarin resistance involved the mutations in the vitamin K epoxide re