早稻品种稻瘟病抗性基因检测及中早39稻瘟病抗性改良.pdfVIP

摘 要 早稻在保障我国粮食安全中具有重要的地位，稻瘟病是威胁早稻生产的主要病害。生产实践 证明，创制、培育和种植早稻抗性品种是防控稻瘟病最有力的措施。本文在对中早 39、中嘉早 17 等 155 份早稻品种及育种材料进行稻瘟病抗性基因检测及表型鉴定的基础上，重点对中早39 进行稻瘟病抗性改良，通过分子标记辅助选择的方法将 Pi25 导入中早 39 中，同时采用 CRISPR-Cas9 技术对中早39 中的抗性负调控因子OsERF922 进行定点编辑，以期定向改良中早 39 稻瘟病抗性。主要研究结果如下： 1. 供试材料为155 份早稻品种及育种材料 （包括65 份在1984-2020 年间审定的早稻品种， 90 份育种材料），利用 18 个稻瘟病主效抗性基因的功能标记鉴定各基因在供试材料中的分布， 并对基因型与田间表型数据进行关联分析。结果表明：供试材料中 Pi36 、Pikp 、Ptr 的抗性等位 基因频率均为100%，Pi25 和pi21 的抗性等位基因频率为0，供试材料携带的基因数范围为7-14 个。表型鉴定结果显示大多数抗性品种都聚集在包含从2011 年-至今审定的 19 个水稻品种以及 71 份育种材料的群体III 中。关联分析结果显示5 个稻瘟病抗性基因 （Pi2 ，Pi9 ，Pigm ，Piz-t 和 Piz ）对应的功能标记（NBS2-Pi9 ，P9 ，G8900，Zt56591 和Z56592 ）与稻瘟病抗病表型显著相关。 2. 以携带稻瘟病抗性基因Pi25 的材料R6 为供体亲本，超级早稻品种中早39 为受体亲本 和轮回亲本，通过杂交、回交和自交以及分子标记辅助选择技术，并结合室内喷雾接种、田间注 射接种叶瘟以及病圃自然发病鉴定穗颈瘟。综合考量抗性表型、基因型以及农艺性状，筛选出4 个携带Pi25 基因，叶瘟及穗颈瘟抗性较中早39 提高，且农艺性状良好的株系FY82 、FY90 、FY125 、 FY137 。 3. OsERF922 负调控水稻对稻瘟病菌的抗性，本研究选取 OsERF922 编码序列第 264-286 共 22 个碱基作为靶序列构建基因敲除载体，并通过农杆菌转化中早 39，获得T0 转基因植株。 OsERF922 发生突变的频率为85%，且突变类型有三种，分别为碱基的缺失、替换、插入，其中 碱基缺失频率最大。对T1 分离群体进行筛选，获得1 个OsERF922 不含T-DNA 的纯合突变株系 N14-8。 关键词：早稻，稻瘟病抗性基因，中早39，分子标记辅助选择，基因编辑 I Abstract Early-season indica rice plays a significant role in ensuring food security in China, rice blast is the most devastating diseases in rice production. Practice has proved that the most effective approach to control blast disease is creating, cultivating and planting resistant cultivars. In this study, phenotyping, genotyping, and genetic association analyses were used to evaluate 155 early-season rice cultivars and breeding lines. Here we reported the improvement of blast resistance of Zhongzao39 by introducing gene Pi25 into Zhongzao39 by molecular marker-assisted selection and editing transcription factor OsERF922 b