烟草西柏三烯二醇对灰葡萄孢菌的抑制作用.pdfVIP

摘 要 由灰葡萄孢菌 （Botrytis cinerea）侵染引起的灰霉病是一种世界性作物病害。选择植物源杀 菌剂替代化学农药，是解决化学农药防治带来的药物抗性、环境污染等问题的重要途径。西柏三 烯二醇 （CBT-diols）在烟草尤其是废弃花序中含量丰富，具有抑菌等多种生物活性，并具有较高 的毒理安全性。本研究以开发CBT-diols 在生物防治灰霉病害中的应用价值为目标，在测定 CBT-diols对灰葡萄孢菌菌丝生长的体外毒力以及活体接种抑制活性基础上，研究了CBT-diols对 灰葡萄孢菌菌丝体形态结构、细胞壁、细胞膜主要组成成分和相关酶活性及细胞膜透性、氧化应 激等指标的影响，并开展了CBT-diols 与不同药剂复配对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用研究。 主要研究结果如下： 1. 分别在离体以及活体接种条件下，采用菌丝生长速率法、孢子悬滴法以及活体接种法研究 了CBT-diols对灰葡萄孢菌的抑制活性。结果表明，CBT-diols 的两个差向异构体 （α-CBT-diol 和 β-CBT-diol）对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用差异不明显，且二者不存在协同作用；CBT-diols 对不同宿主的灰葡萄孢菌及耐药菌株 （嘧菌酯、啶酰菌胺）菌丝生长均具有较好抑制活性，EC50 在9.72 μg/mL~16.45μg/mL 范围内，其EC 显著小于蛇床子素、丁子香酚等商品化的植物源农药； 50 灰葡萄孢菌的菌丝生长比孢子萌发对CBT-diols 更敏感；200 μg/mL 条件下，CBT-diols对葡萄、 草莓、番茄果实活体菌丝接种抑制率在71.90%~84.29%范围内。 2. 通过扫描电镜、透射电镜观察，结合结晶紫-刚果红染色、PI 染色结果表明，CBT-diols处 理后，灰葡萄孢菌细胞壁完整性几乎没有改变，但其膜系统严重损伤，高浓度下造成细胞器解体； CBT-diols 处理，能显著提高菌丝几丁质酶的活性，造成几丁质合成前体物D-GlcNAc 积累； CBT-diols 处理使菌丝体细胞膜通透性增加，导致菌丝体培养液还原糖、蛋白质、核酸浓度及电 导率升高；CBT-diols 处理降低菌丝体麦角甾醇和亚油酸等细胞膜主要成分的含量，并增加菌丝 体丙二醛的含量，表明细胞膜结构受到破坏，并发生了膜脂质过氧化反应；进一步研究表明， CBT-diols 处理导致的菌丝体膜系统脂质过氧化作用与氧化应激反应有关，表现为：菌丝体中ROS 含量升高，H O 含量降低，抗氧化酶CAT 和POD 酶活性升高，但SOD 酶活性降低。 2 2 3. 采用共毒因子法研究了CBT-diols 与4 种化学杀菌剂以及7种植物源提取物复配对灰葡萄 孢菌体外毒力的影响，结果表明，CBT-diols 与所选药剂均无复配增效作用。为开发CBT-diols在 作物灰霉病杀菌剂方面的应用价值，下一步还需在深入开展其抑菌机制的分子基础研究上，进一 步加强CBT-diols 与其他生物或低毒化学杀菌剂的复配增效作用研究，并开展CBT-diols及其复配 对作物灰霉病的田间防效试验研究。 关键词：烟草西柏三烯二醇，灰葡萄孢菌，抑菌活性，抑菌机制，增效复配 I Abstract Gray mold, caused by Botrytis cinerea, is one of major fungal diseases on crops. Botanical fungicides are preferred over chemical fungicides to control gray mold since they are less toxic to the environment and areresistant to fungicide.Cembratrien (CBT)-diolsare carbocyclic diterpenesfound in abundance in Nicotiana, especially in tobacco inflorescence, and possess a wide range of biological activities.In order to develop the a