香菇草酸代谢响应环境pH的研究.pdfVIP

摘 要 香菇作为中国食用菌中主要的栽培种类，产量长期位于各类食用菌中首位。近年来，香菇菌 棒的生产工厂越来越多，但工厂化制作的菌棒经常出现发菌异常的问题，主要表现为菌丝生长缓 慢，甚至不萌发，但具体的原因尚不清楚。调研时发现木屑在大规模的露天存放过程中，发酵使 木屑pH 下降，栽培时工厂利用石灰或碳酸钙将培养料pH 调节至正常水平的6-7 ，但仍然出现抑 制香菇菌丝生长的问题，猜想可能与环境pH 调节有关。针对这一问题，本论文通过研究培养基 pH 与香菇菌丝生长代谢的关系，明确环境pH 影响香菇菌丝生长的机制，本论文的研究结果如下： 1、环境pH 影响香菇菌丝的正常生长。酸化木屑中含有高浓度的柠檬酸和乳酸会抑制香菇菌 丝生长。在PDA 培养基上试验发现，无缓冲作用时香菇菌丝能在pH 3-7 正常生长；有缓冲作用 时香菇菌丝只能在pH 3-4 正常生长。酸化木屑添加石灰后形成的柠檬酸钙和乳酸钙具有缓冲作 用，缓冲作用显著抑制香菇菌丝的生长，随有机酸浓度增加缓冲作用影响越为明显。当pH 调节 至最适4 时香菇菌丝生长正常，可以消除缓冲作用和有机酸浓度的影响。 2 、香菇分泌草酸降低环境pH 。当生长的培养基pH 高于4 时，香菇菌丝随生长的变化将培 养基pH 逐渐降至3-4 。草酸分泌量随培养基pH 增加而增加，生长速度也随pH 增加而降低。外 源添加碳酸钙时培养基pH 会升高，在碳酸钙培养基上会形成由草酸钙晶体构成的透明圈。香菇 菌丝对可溶性草酸盐耐受度较低（2.5 mM 以内），不溶性草酸钙耐受度很高可达到50 mM 。 3、转录组分析草酸在香菇中的代谢途径。选择四种不同pH 条件下生长的香菇菌丝进行转录 组分析，共鉴定差异基因9073 个。差异基因分析中发现不同pH 可能会影响到香菇菌丝中多糖、 海藻糖、糖原含量的变化，并利用RT-PCR 验证了草酸代谢途径与柠檬酸循环和乙醛酸循环之间 的重要关系，绘制出草酸代谢的基本路径。对草酸合成的关键基因LeOAH1 进行基因克隆及原核 表达，发现调控LeOAH1 基因表达的主要是响应pH 的转录因子PacC 。 综上所述，本文通过研究环境pH 与香菇生长的关系，揭示了香菇的草酸代谢途径，阐明了 环境pH 对香菇菌丝生长的重要作用，这为香菇菌棒生产提供了理论指导。 关键词：酸化木屑，缓冲作用，pH 调节，草酸代谢，香菇 I Abstract Lentinus edodes is one of the cultivated species among edible fungi in China, and its production has been the first among various edible fungi for a long time. In recent years, there have been more and more factories producing shiitake mushroom bags, but the factory-produced mushroom bags often have the problem of abnormal germination, mainly manifested by the slow growth of mycelium, or even no germination, but the specific reason is not clear. During the investigation, it was found that during the large-scale open storage of wood chips, the pH of the wood chips was reduced by fermentation. The factory often used lime or calcium carbonate to adjust the culture material to pH 6-7, but still inhibited the growth of mushroom mycelium. To resolv