外泌体在口蹄疫病毒进行细胞间传播中的作用研究.pdfVIP

摘 要 外泌体是一种细胞分泌的起源于内体的胞外小囊泡，外泌体可以介导胞内蛋白、mRNA 、 miRNA 的细胞间转运，这些外泌体中所包含的分子可在一定程度上调节靶细胞的生理活动。有研 究报道了病毒或病毒RNA 可以借助外泌体在细胞间传播，以此逃避宿主免疫系统的识别与清除。 口蹄疫病毒是一种单股正链RNA 病毒，病毒在与受体结合后进入细胞内部并在内体中释放出病 毒RNA 。外泌体起源于内体，在空间上外泌体的起源与病毒的复制周期存在交叉点。 首先，从细胞培养液中富集了细胞感染病毒后所分泌的外泌体。在获得外泌体样品后，分别 利用透射电镜观察外泌体，免疫印迹分析外泌体标志物以及纳米粒径测定样品粒径范围，证实获 得了较高纯度的外泌体样品。在将外泌体样品孵育细胞后，我们观察到细胞发生了类似口蹄疫病 毒感染造成的细胞病变，并且在细胞中可以检测到病毒蛋白的存在。在使用外泌体生成抑制剂处 理细胞后，我们发现外泌体中病毒的拷贝数随着外泌体的抑制明显减少。这些实验结果表明外泌 体可以携带病毒的感染性成分。 从感染了口蹄疫病毒的细胞所分泌的外泌体中提取总RNA ，然后利用PCR 技术能够扩增到 病毒的基因组全长。利用RNA 原位杂交技术，在共聚焦显微镜下可以观察到病毒RNA 与外泌体 的标志物存在共定位。随后，本研究又构建了不含结构蛋白的口蹄疫病毒亚基因组复制子。通过 复制子转移试验证实在缺失了病毒结构蛋白成分的情况下，复制子依然可以进入外泌体中，并能 以被外泌体介导的方式进入敏感细胞。这些实验结果表明病毒的基因组 RNA 可以是外泌体携带 的病毒感染性成分。 为探究存在中和抗体的条件下病毒通过外泌体进行传播的情况，本研究将外泌体样品与中和 抗体作用后再孵育细胞，我们发现此时外泌体所携带的病毒感染性成分仍然能形成噬斑。将与中 和抗体作用的外泌体样品再感染细胞后，发现了病毒滴度降低不明显。这些实验结果表明了在存 在中和抗体的条件下，口蹄疫病毒仍然能通过外泌体进行传播。 本研究发现外泌体可以携带口蹄疫病毒的感染性成分进入靶细胞造成细胞感染，而病毒的基 因组RNA 可以作为外泌体携带的感染性成分，并且这种外泌体介导的感染性成分传播在一定程 度上能够逃避中和抗体的作用。传统上认为口蹄疫病毒通过裂解宿主细胞释放病毒粒子的方式进 行细胞间的传播，我们的研究结果表明口蹄疫病毒还能通过外泌体途径将病毒的感染性成分传播 至靶细胞造成靶细胞感染，这种口蹄疫病毒的传播的新途径将为口蹄疫防治提供新的思路。 关键词：外泌体，口蹄疫病毒，复制子，中和抗体 I Abstract Exosomes are extracellular vesicles that can be secreted by cells and originate from endosomes. Exosomes can mediate the intracellular transport of intracellular proteins, mRNA, and miRNA. These molecules can regulate the physiological activity of target cells to a certain extent. Some studies have reported that viruses or viral RNA can be transmitted between cells with the help of exosomes to escape recognition and clearance by the host immune system. Foot-and-mouth disease virus is a single-stranded positive-strand RNA virus. After binding to the receptor, the virus enters the cell and releases the viral RNA in the endosome. Exosomes originate from endosomes, and there is an intersection between the origin