水稻类病斑突变体oshpl3和lmla1的鉴定与遗传分析.pdfVIP

摘 要 植物类病斑突变体会自发表现出类似过敏反应（HR ）斑点和自发激活体内免疫反应。本研究 经甲基磺酸乙酯（EMS ）诱变长粒粳稻品系CG3 （WT ）获得两个类病斑突变体oshpl3 和lmla1， 重点开展突变体表型分析、抗性鉴定以及候选基因定位等方面的研究，为进一步探索植物免疫或 抗性形成机制提供借鉴。 1、突变体oshpl3 在播种后7 天植株叶片上开始随机出现白色小斑点，后期逐渐转变成大的 褐色斑点。主要农艺性状考查发现，除穗长外，突变体oshpl3 中株高、有效穗数、总粒数、结实 率、千粒重和单株产量等均显著低于野生型 （WT ）。无菌条件下，突变体oshpl3 的斑点能够自发 形成。伊文思蓝染色和TUNEL 实验显示，与WT 相比，突变体oshpl3 叶片存在大量的细胞死亡， 同时DAB 染色显示其 H O 过量积累，并伴随超氧化物歧化酶（SOD ）活性升高、过氧化物酶 2 2 （POD ）和过氧化氢酶（CAT ）活性降低以及H O 和丙二醛（MDA ）含量升高。病原菌模式分 2 2 子flg22 和chitin 处理显示，相对于WT ，突变体oshpl3 中活性氧（ROS ）积累速率明显高于WT 且一直呈现升高趋势。白叶枯接种实验表明，突变体oshpl3 表现出对白叶枯病菌抗性，且其PR 相关基因和JA 相关基因表达量在接种前后均高于WT 。遗传分析结果显示，突变体oshpl3 表型 受一对隐性核基因控制，并且通过图位克隆的方法将突变体基因精细定位于2 号染色体短臂位于 标记SID40-6 和SID-8 之间51.4 kb 物理区间内，该区间包含10 个ORF。测序后发现，突变体中 候选基因OsHPL3 发生G1006A 突变，从而导致在OsHPL3 蛋白跨膜区第295 个氨基酸G 变为 D 。亚细胞定位表明，OsHPL3 蛋白定位于叶绿体、细胞质和一个未知的细胞器。根据我们的研究 结果，认为突变体oshpl3 类病斑表型和白叶枯病菌抗性增强与其ROS 过量积累及PR 基因和JA 信号激活密切相关，且OsHPL3G295D 最有可能导致突变体oshpl3 表型，同时这一结果也能为研究 OsHPL3 蛋白功能提供新线索。 2 、叶尖类病斑突变体lmla1，播种后40 天，植株老叶上能明显观察到红棕色斑点，且叶尖 部位发生枯萎。红棕色斑点出现在叶片枯萎之前，且该表型由老叶逐渐向新叶发展。农艺性状考 查发现，除结实率外，突变体lmla1 中株高、有效穗数、穗长、总粒数、千粒重和单株产量等重 要农艺性状均极显著低于WT 。组织化学分析结果显示，与WT 相比，突变体lmla1 存在大量细 胞死亡和H O 过量积累，且突变体叶片中SOD 活性极显著上升，CAT 和POD 活性则显著下降， 2 2 H O 和MDA 含量极显著升高。遗传分析表明，突变体lmla1 表型受一对隐性核基因控制。通过 2 2 图位克隆方法，将候选基因精细定位于第1 号染色体长臂56.8 kb 区间内，该区间含有11 个候选 基因。我们研究结果表明突变体lmla1 表型依赖于植株发育进程，且与细胞死亡、ROS 过量积累 及其他因素有关，同时为克隆OsLMLA1 奠定了坚实的基础。 关键词：水稻，类病斑突变体，遗传分析，基因定位，抗病性 I Abstract Plant lesion mimic mutants spontaneously display hypersensitive response (HR)-like lesion and activate the immune response. In this study, two rice lesion mimic mutants, oshpl3 (Oryza sativa hydroperoxide lyase 3) and lmla1 (lesion mimic leaf apex 1), were obtained from a mu