鼠类抗药靶基因多态性及在黄胸鼠抗药性评估中的应用.pdfVIP

摘 要 啮齿目是世界上分布最广泛的哺乳类动物之一，其中的一些鼠类不仅危害农林牧业的生产， 并且携带多种疾病，危害人类的生命健康。抗凝血类灭鼠剂是目前世界上应用最为广泛的灭鼠剂， 但近年来鼠类的抗药性的问题愈发严重。鼠类产生抗性的形式主要有两种，多数鼠类抗性种群的 产生是因为在抗凝血类灭鼠剂的选择作用下，导致种群中携带抗性突变的个体的频率逐渐升高； 另外，一些生活在干旱地区的鼠类对抗凝血类灭鼠剂表现出天然的抗性。维生素K 环氧化物还原 酶复合物亚基 1 （Vitamin K epoxidereductase complex subunit 1, Vkorc1）是维生素K 循环中的关 键基因，也是抗凝血类灭鼠剂作用的靶基因，该基因上的突变可以导致鼠类的抗性。维生素K 循 环中的依赖还原型辅酶 I(II)醌氧化还原酶 （NAD （P）H QuinoneDehydrogenase 1,Nqo1）和与 凝血因子活化相关的γ-谷氨酰羧化酶 (Gamma-Glutamyl Carboxylase, Ggcx)也被认为与鼠类的抗 药性相关。本文通过比较干旱地区和其它生境鼠类的Vkorc1、Ggcx、Nqo1基因多态性，结合系 统进化分析和选择压分析，探讨3个基因在干旱区鼠类尤其是在天然抗性的鼠类中是否发生适应 性进化及推测可能导致适应性进化的原因；同时以黄胸鼠为重点研究对象，利用 Vkorc1基因多 态性评估我国黄胸鼠种群的抗性水平，并以相对中性进化的线粒体基因D-loop 为分子标记，分 析我国抗性黄胸鼠抗性相关变异在种群间的基因流。主要结果如下： 1. 发现干旱区鼠类的Vkorc1基因进化速率(dN/dS值)要明显高于其它生境中的鼠类，并且 在地中海小家鼠和嗜沙肥鼠的Vkorc1基因中检测到适应性进化的信号。然而，在干旱区鼠类的 另外2 个基因Ggcx 和Nqo1均没有检测到选择信号。干旱区鼠类地中海小家鼠和嗜沙肥鼠Vkorc1 基因的加速进化可能与适应缺乏维生素K 的干旱环境相关。 2. 发现我国黄胸鼠种群的Vkorc1基因携带3 个突变Ala26Thr、Ala41Ala 和Tyr139Cys，其 中Tyr139Cys 已被证实可以导致不同鼠类对第一代和第二代抗凝血类灭鼠剂的抗性，在四川、广 东、福建、湖南、西藏种群中都有发现，其中湖南突变频率最高可达66.7%。结合D-loop 基因流 分析发现，西藏地区黄胸鼠抗性突变可能是从四川输入的。我国多地区黄胸鼠Vkorc1 出现 Tyr139Cys抗性突变，该突变在种群中的频率可以用来监测种群的抗性水平。Ala26Thr 突变可能 会导致黄胸鼠的抗性，但仍需进行进一步的生理抗性检测。 本研究通过分析不同鼠类 Vkorc1基因的多态性，揭示了干旱区鼠类的Vkorc1与其它生境中 鼠类相比更容易产生适应性进化，获得的Vkorc1 突变数据也为后续开展不同鼠类抗药性机制研 究提供了分子基础。同时通过对黄胸鼠种群内Vkorc1 多态性分析，发现一个用于抗性检测的分 子标记，有效评估了我国不同黄胸鼠种群的抗性水平，为抗凝血类灭鼠剂的科学使用提供理论指 导。 关键词：Vkorc1，适应性进化，抗凝血类灭鼠剂，抗性，黄胸鼠 I Abstract Rodents are one of the most widely distributed mammals in the world. Some pest rodents destroyed crops, damaged animal husbandry, and carried a variety of zoonotic diseases.Anticoagulant rodenticideshavebeen widely used for therodent control aroundtheworld,but anticoagulant resistance hasgreatly impairedthe efficacy oftherodenticides.While the generation of anticoagulant resistance in most rodent populations was owing to the selection by anticoagulant rode