水稻少蘖矮秆基因OsDLT10的图位克隆.pdfVIP

摘 要 水稻分蘖数目直接影响有效穗数进而引起产量改变，其形成和生长过程受遗传和激素、温度、 水分与光照等外界因子共同调控。水稻分蘖数目相关基因的研究有助于阐明腋芽形成和发育的分 子机制，对构建水稻理想株型具有重要意义。本研究通过甲基磺酸乙酯 （Ethyl Methylsulfone ， EMS ）诱变获得了一个以中恢8015 （Zhonghui8015 ，Wild Type ，WT ）为背景的少蘖矮秆突变体 osdlt10 （dwarf and low tillering 10 ），对该基因在分蘖形成和发育方面的影响和相关调控途径进行 了研究，以期为水稻株型的育种应用提供基因资源和理论基础。主要结果如下： 1、水稻少蘖矮秆突变体osdlt10 的表型贯穿其全部生育期。osdlt10 在苗期即出现生长迟缓和 浅根现象，分蘖前期已经开始表现出少蘖、矮秆和叶尖卷。至分蘖盛期，矮秆和分蘖减少表型越 发显著。在成熟期时，分蘖数目和株高极显著降低，伴随着籽粒变宽、结实率低和生育期延长等 表型。对腋芽的细胞学观察发现，osdlt10 突变体的腋芽形成存在缺陷且生长缓慢，并对腋芽、茎 秆、叶片、颖壳、根尖组织等不同组织细胞的细胞大小产生不同程度的影响； 2 、遗传分析表明osdlt10 的性状受一对隐性核基因控制，采用图位克隆的方法将该基因精细 定位于第 10 染色体长臂上的两个引物wxx-17 和wxx-53 之间，物理距离约为57.78 kb ，该区间 包含10 个开放阅读框。测序发现第9 个开放阅读框上存在一个单碱基 （G ）的缺失，导致其编码 的氨基酸发生移码突变后翻译提前终止。功能互补试验和 CRISPR/Cas9 系统敲除试验证实了 DUF630/632 基因LOC_Os10g41310 的单碱基缺失引起osdlt10 突变体的表型变化，并验证了该基 因在分蘖数目方面的功能。亚细胞结果显示OsDLT10 定位于细胞质中的一种点状细胞器中； 3、表达模式分析表明OsDLT10 主要在茎节、腋芽基部、叶鞘基部和叶枕组织中高表达，且 在整个生长发育过程中，OsDLT10 表达量呈逐渐上升趋势。激素测定结果显示，osdlt10 突变体 的茎基部和腋芽基部的内源生长素含量极显著降低，且高浓度生长素处理能抑制 OsDLT10 的表 达，表明OsDLT10 的表达水平可能与生长素有关。生长素相关基因的qPCR 分析结果显示，osdlt10 突变体中生长素转运基因（PINs ）和生长素早期响应基因（IAAs ）的表达量均极显著上调，表明 该基因隐性突变后可能影响了生长素的极性运输和局部生长素含量； 4 、分蘖数目相关基因的表达分析发现，WUS 相关基因MOC3 、DWT1 、WOX4 和FON1 的 表达量均显著下调，而MOC1 和OsTB1 表达水平均显著上调。推测OsDLT10 可能通过WUS-CLV 途径调控腋芽的形成和生长，并由此对水稻分蘖的形成和发育产生影响。 关键词：水稻，分蘖数目，OsDLT10，腋芽，生长素 V Abstract The tillering number, which formation and growth process are regulated by gnentic and external factors such as hormones, temperature, moisture, and light, etc, affect rice yield through directly impacting the number of effective panicles. The researches of genes related to the tillering number are conducive to elucidate the molecular mechanism of the axillary buds formation and development, which is of great importance