水稻矮化多分蘖基因OsIAA16的图位克隆及分蘖调控机制研究.pdfVIP

摘要 株型是决定作物产量的关键因素，是主要作物选择和驯化的重要驱动力。在水稻和小麦等 作物中，紧凑和半矮化的株型、短而粗的节间结构极大地提高了作物的收获指数和产量。研究 植物的株型特性对于培育高产品种，满足世界上日益增长的口粮需求至关重要。在本研究中， 我们通过EMS( 甲烷磺酸乙酯)诱变鉴定了水稻矮化多分蘖突变体hd103，用图位克隆的方法获得 了影响该表型的基因OsIAA16，该基因编码一个AUX/IAA 家族蛋白OsIAA16，参与生长素信号 通路。过表达和 RNAi 介导的敲减以及CRISPR Cas-9 介导的敲除进一步证实了OsIAA16 参 与水稻分蘖形成。突变体基因编码区第 185 位碱基发生了 C 到 T 的替换，导致蛋白质第 62 位 氨基酸由脯氨酸变成了亮氨酸，破坏了保守的降解决定子基序，即GWPPV 变为 GWLPV，这种 突变减弱了 OsIAA16 蛋白和生长素受体 TIR1 (TRANSPORT INHIBITOR RESPONSE-1)的亲和 性。因此，OsIAA16 蛋白的降解被抑制，导致突变体表现出生长素相关的生长缺陷，并且对外 源生长素的敏感性降低。生长素通过生长素响应因子(Auxin Response Factors, ARFs) 发挥作用， 而 AUX/IAA 蛋白则是生长素信号通路的抑制因子。我们鉴定了 3 个能与 OsIAA16 互作的蛋白 ARF6、ARF11 和 ARF17。除了分蘖数增多，hd103 突变体表现出多种缺陷表型，比如中胚轴伸 长增加、叶片衰老延缓、对独脚金内酯(Strigolactones, SLs)不敏感等，这些表型与独脚金内酯信 号通路突变体类似。hd103 突变体中主要的独脚金内酯信号通路成员 D3 和D 14 的表达量都下调， 并且独脚金内酯合成基因 D10 及其下游靶基因 TB1 的表达量也下调。有意思的是，hd103 突变 体中 GR24 （人工合成的独脚金内酯类似物）介导的D53 蛋白(独脚金内酯信号途径的阻遏蛋白) 降解过程相对延缓 ；施加外源生长素也能诱导 D53 蛋白降解，但这个过程在 hd103 突变体中也 减弱了，这与独脚金内酯合成突变体 d10 的反应一致。这表明正常的生长素信号对独脚金内酯 介导的D53 蛋白降解是必要的，反过来也是如此。 本研究的另一个发现是 hd103 突变体对外源施加的蔗糖高度敏感。我们观察到独脚金内酯 信号受阻突变体在无糖条件下不能长出分蘖，但外源蔗糖的添加能很快刺激突变体长出分蘖。 我们发现独脚金内酯和蔗糖在分蘖发育的过程中相互拮抗，高浓度的蔗糖能解除GR24 对分蘖的 抑制作用和 D53 蛋白的降解反应。我们还发现施加蔗糖能抑制独脚金内酯信号转导组分 D3 基 因的表达，而过表达 D3 基因能解除蔗糖对分蘖生长的促进作用和对 D53 蛋白的稳定作用。D3 能够促进D 14 通过蛋白酶体途径降解，而蔗糖能够稳定D 14，这进一步表明蔗糖抑制D3 的表达， 从而抑制独脚金内酯信号途径。d3 突变体相对于d14 和野生型表现出对蔗糖超敏感，这表明D3 蛋白可能是水稻中蔗糖促进分蘖发育的一个靶位点。这些结果共同表明，生长素、独脚金内酯 和蔗糖三者能够根据环境信号互相调节，从而使植物表现出理想株型。 关键词 ：水稻, 生长素、独脚金内酯、蔗糖, 分蘖发育 I ABSTRACT Plant architecture is the key determinant in crop yield and considered as the main driving force for selection and domestication events in major crop species. Compact and semi-dwarf plant architecture with short and thick internodes dramatically increases harvest index and crop yield in many crop species like rice and wheat. Studying plant architecture is important for deve