水稻、小麦内生固氮菌固氮酶nifH基因多样性及其活性研究.pdfVIP

摘 要 水稻、小麦是我国的主要粮食作物，在粮食生产和人民生活中占有重要地位。本论文以我国 黑龙江、湖北和河北等地区大田生长的水稻、小麦为材料，采用nifH 基因实时定量PCR、nifH 基因变性梯度凝胶电泳、高通量测序、以及nifH 基因反转录PCR 结合变性梯度凝胶电泳等技术， 系统探索了施用微生物肥料、不同作物品种、不同生育期等因素对水稻、小麦内生固氮菌nifH 基 因数量、优势类群、nifH 基因活性的影响。主要研究结果如下： （1）施用生物肥料对水稻、小麦内生固氮菌nifH 基因数量、固氮菌类群多样性影响显著。 8 7 水稻根内、茎内、叶内nifH 基因数量分别为 （1.51～17.80）×10 拷贝/g、 （1.01～2.76）×10 拷 6 贝/g 和 （2.04～19.50）×10 拷贝/g。与未施用生物肥料的对照处理相比，施用生物肥料后水稻根 内nifH 基因数量呈持平或降低趋势，但茎、叶内nifH 基因数量显著增高，水稻内生固氮菌类群、 优势类群都发生了显著变化，小麦试验与水稻结果趋势相同。总体上优势类群有Azospirillum、 Pseudomonas、Sinorhizobium、Methylocystis、Sphingomonas、Rheinheimera、Azoarcus 等。 （2）水稻品种间内生固氮菌nifH 基因数量差异不显著，但固氮菌类群多样性差异显著。常 见类群有Azospirillum、Ideonella、Sinorhizobium、Azoarcus、Pseudacidovorax、Methylocystis、 Sphingomonas、Bradyrhizobium、Xanthobacter、Rheinheimera 等。 （3）不同生育期水稻根内nifH基因数量差异显著，幼苗期和花期nifH基因数量分别为（1.90～ 6 9 10.60）×10 拷贝/g、 （1.23～2.47）×10 拷贝/g，且多样性发生了显著变化。花期的优势类群 是Rubrivivax、Sideroxydans、Dechloromonas、Sinorhizobium、Pseudacidovorax、Anaeromyxobacter 等。小麦从苗期到返青期内生固氮菌类群多样性也发生了显著变化，返青期的优势类群是 Pseudacidovorax、Pelomonas、Leptothrix、Rubrivivax、Paraburkholderia、Sinorhizobium、Skermanella 等。 （4）nifH 基因的cDNA 分析，揭示了Bradyrhizobium、Kosakonia、Sphingomonas、Ideonella、 Azohydromonas 属是幼苗期水稻内生固氮菌活跃类群，Bradyrhizobium、Pelomonas、Sphingomonas、 Dechloromonas 属是花期水稻内生固氮菌活跃类群；Bradyrhizobium、Paraburkholderia 属是返青 期小麦内生固氮菌活跃类群。 关键词：水稻，内生固氮菌，生物多样性，nifH基因，固氮菌活跃类群 Ⅰ Abstract Rice andwheat arethemain foodcropsin China,andtheyplay an importantrole in foodprodution and peoples lives.Nitrogen fertilizer is one of the main factors that affect the growth of crops. In this paper,rice andwheat grown in the fields ofHeilongjiang,Hubei and Hebeiprovinces in China areused as materials. Real-time quantitative PCR, gradient gel e