水稻中类C4解剖学结构材料的创制和筛选.pdfVIP

摘 要 绿色植物绝大部分干物质来源于光合作用，C4 光合作物相较于 C3 光合作物具有产量高 50-100%，水分利用率高一倍以及氮素利用率高三大优势。利用合成生物学和系统/整合生物学将 C3 作物水稻改造成具有C4 循环的C4 水稻，具有极大的提升光合效率，进而提升产量的潜力。 与C3 光合作用相比，C4 光合作用最明显的特征是光合反应发生在叶肉细胞、维管束鞘细胞组成 的二类细胞系统中。因此构建C4 水稻的必要前提是在水稻中构建出具有类C4 解剖学结构的叶片。 寻找、鉴定与类C4 解剖学结构形成有关的基因具有重要生物学理论和生产意义。 转录因子能够在转录水平以及转录后水平上调控基因表达，对植物发育控制、诱导防御和应 激反应产生调控。C4 植物是由C3 植物进化而来，C4 植物的转录因子也随之产生进化。C4 植物 的转录因子通过调节靶基因的表达水平让植物产生适合 C4 光合途径发生的物理场所与反应条 件。通过对C3 植物与C4 植物转录因子的转录组分析可以得到与C4 光合途径相关的转录因子。 这些转录因子很可能参与到C4 光合途径建成的调控中。 本论文以转录因子为研究对象，通过将玉米转录因子转入水稻中构建转基因水稻，在转基因 水稻中筛选出具有类C4 解剖学结构的转基因植株并选定候选基因，对其进行表达模式以及功能 研究，试图找出与水稻类C4 解剖学结构发育相关的转录因子，为构建C4 水稻提供新的思路。本 论文主要结果如下： 1、对500 个玉米转录因子进行分析，将其分为ARF 、bHLH 、GRAS、MYB 等44 个家族。 通过Gateway 系统构建了500 个玉米转录因子过表达转水稻载体。 2 、使用农杆菌介导法对玉米转录因子转化载体进行转化，最终330 个玉米转录因子得到转 基因植株，占总数的66%。不同的转录因子家族之间的转化成功率存在着明显差异。转基因水稻 的阳性率达到90% 。 3、在田间观察到一批出现表型的转基因水稻，占总体样本的22% 以上。筛选出76 个光合效 率以及气孔导度与日本晴有明显区别的转基因水稻系，约占总体样本的23% 。 4 、筛选出一批叶片解剖学结构发生改变的转基因水稻，得到一批与类C4 解剖学结构形成相 关的候选玉米转录因子，如ZmGRAS19；筛选出一批叶片维管束鞘细胞中疑似存在叶绿体的转基 因水稻，得到一批调控叶绿体发育的候选玉米转录因子，如ZmGLK57。 5、对筛选出来的玉米转录因子的水稻同源基因进行了过表达、CRISPR/Cas9 敲除等相关载 体的构建，并将其进行遗传转化。 关键词：C3 ，C4，光合作用，转录因子，花环结构 I Abstract Most of dry matter of green plants come from photosynthesis. Compared with C3 photosynthesis crops, C4 photosynthesis crops have three major advantages ：50-100% higher yield, double the water utilization rate and higher nitrogen utilization rate. Transforming C3 rice into C4 rice which have C4 cycle through synthetic biology and systems/integrated biology have the potential to greatly improve photosynthetic efficiency and thus yield. Compared with C3 photosynthesis, the most obvious characteristic of C4 photosynthesis is that the photosynthetic reaction o