基于固定化酶的硫辛酸甾醇酯的酶法制备与活性研究.pdfVIP

摘 要 硫辛酸在抗氧化、血糖值的安定化、保护肝脏、抗衰老、抵抗癌症等方面中都有着不可替代 的作用，但硫辛酸具有光热不稳定性，常温下易分解且溶解度不高，生物利用度较低的问题。这 大大限制了其在不同行业领域的应用。为了高硫辛酸的稳定性和溶解性，拓宽其在不同行业领 域的应用，本文选用功能活性物质甾醇与硫辛酸通过酯化合成了硫辛酸甾醇酯，并研究了它的理 化性质。 针对目前硫辛酸甾醇酯酶法合成中存在的反应时间长、催化效率低的问题，在这项工作中， 以皮克林乳液体系作为固定化酶的制备工厂，超声波作为固定化的辅助手段，辛基疏水修饰的中 空介孔硅球为载体成功制备出高活性的固定化酶 （UIP-HMSS@CRL ）。利用 TEM、SEM、BET 、 FTIR 和 TGA 对载体材料和固定化酶的结构和部分物理化学性质进行了表征。考察了固定化的影 响因素，确定了最佳的固定化条件为：磷酸缓冲液pH 值为 7，初始酶浓度为 14 mg/mL，C -HMSS 8 的占比为 3.0 wt%，Rw/o 为 7.5:1，超声条件为 100 W, 10 min。考察了固定化酶的重复使用性、 o 热稳定性和动力学参数。结果表明，即使在 65 C，UIP-HMSS@CRL 的酯化率也高达 78.3% 。固 定化酶在重复使用 10 个循环后，仍然能达到 90.0% 的酯化率。合成硫辛酸谷甾醇酯的动力学结果 -3 表明，UIP-HMSS@CRL 催化体系的表观动力学常数 V /K =11.24 Í10 ，是普通水相体系固定化 m m 酶 （C -HMSS@CRL ）和游离 CRL 催化体系的 3.6 倍和 8.1 倍。此外，利用红外光谱定量测定了 8 超声波处理和 Pickering 乳液体系对脂肪酶二级结构的影响。红外拟合结果显示：超声处理和 Pickering 乳液体系均会引起酶构象中 β-折叠结构的增加和 α-螺旋结构的减少。 将固定化酶应用到硫辛酸和甾醇的酯化反应中，实现了硫辛酸甾醇酯的高效酶法制备。通过 单因素实验，优化了固定化酶催化酯化合成硫辛酸甾醇酯的工艺条件。确定最佳酯化条件为：甾 o 醇占比为 120 mmol/L，甾醇与硫辛酸的摩尔比例为 1:2, 酶的添加量为 18 g/L，反应温度 50 C 。 对比了 CRL、UI-CRL （超声辅助CRL ）、C -HMSS@CRL 以及UIP-HMSS@CRL 的催化性能。 8 结果表明，UIP-HMSS@CRL 作为酶促酯化反应的催化剂，能够在最短的时间内获得最高的 CE 值（catalytic efficiency ），它的含义是单位时间（h ）内单位催化剂（g ）转化的底物摩尔数）（6.4 mmol g- 1 h-1 ），分别是 C -HMSS@CRL 、UI-CRL 和游离 CRL 的 1.7 倍、4.9 倍和 9.1 倍。用不同 8 的甾醇（谷甾醇、豆甾醇、麦角甾醇、胆甾醇）与硫辛酸进行酯化反应，UIP-HMSS@CRL 表现 出良好的催化性能，催化效率均比游离CRL 高 8.5-9.8 倍。这些结果表明 UIP-HMSS@CRL 具有 广泛的适应性和高效性。 o 通过 60 C 烘箱加速氧化法、Rancimat 法和差示扫量热法（DSC ），考察了甾醇、硫辛酸 和硫辛酸甾醇酯对亚麻籽油氧化稳定性的影响。结果表明，硫辛酸、甾醇均可以高亚麻籽油的 抗氧化性能，且产