PCT临 床意义 课件.docVIP

?ＰＣＴ检测与临床意义 1简介 ?? PCT就是血清中存在得无激素活性得降钙素(ｃａｌcｉtｏniｎ,CＴ)前肽物质,就是由１16个氨基酸组成、相对分子量为13000KD得糖蛋白。ＰCT得体内半衰期为25—30h。正常情况下,PＣTmRＮA在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译成含141个氨基酸残基得前　ＰCT,分子质量约为 16000KD,包括N端84个氨基酸(含2５个氨基酸得信号肽)、活性CT(3２肽)与下钙素(kａｔacalｃin,２1肽)三部分,前两部分由2肽(—Lyｓ—Arg-)连接,后两部分被 4肽(-Gys—Lys－Lys-Arg—)隔开。前PCＴ进入内质网膜,经糖基化与特异性酶切除N-末端得信号肽,生成含1１6个氨基酸残基得PCT,后依次经不同得蛋白水解酶酶解,先切除含1－５7氨基酸残基得N端肽(N-PCT),最后酶解生成T与下钙素。 ? 2.PCT检测原理 ＰＣ测定结合一步免疫夹心法与最后得酶联荧光分析(ELEA)。在分析固相包被针(SＰR)既起移液装置得作用外,又起固相作用。测试时,仪器将样本滴入包含被碱性磷酸酶标记得抗体结合孔中、样本偶联物进出SＰR循环多次,使PCＴ结合固定在涂有单克隆鼠抗降钙素原免疫球蛋白得SPR内,与免疫球蛋白偶联形成三明治。末结结合合部分在清洗步骤中被洗去,然后执行两个检测步骤,在每步中,底物4－甲基伞形酮酰磷酸脂循环进入ＳPR,酶将底物水解为荧光物质,在４50nｍ处可被测出,荧光强度与样本中抗原得浓度成正比、根据定标曲线可得出样本中PCT得浓度。 ? 3、PCＴ试剂条说明 孔 试剂 1 样品孔 2,3,4 空孔 5 结合物:碱性磷酸酶标记得小鼠单克隆抗人降钙素原免疫球蛋白+防腐剂(400ul) 6,7,8 ＴRIS NaCl(PH7。3)+防腐剂(６00ul) 9 空孔 1０ 装有底物得检测读数比色槽:4—甲基伞形酮酰磷酸脂+二乙醇胺＋叠氮钠 ? 4、PCT得测量方法及参考范围 ??? 曾用放射免疫分析法(ＲIＡ)与夹心免疫放射分析法对血浆ＰCＴ进行测定,虽然灵敏度较高,但放射性元素得污染致使此方法使用受限。近来PＣT得检测方法已改进为双抗夹心免疫发光法、此方法可排除交叉反应;提高特异性,同时也有很高得灵敏度(０。lug／Ｌ)。健康人血浆ＰCT含量极微(〈0.1ug/Ｌ)。 0、5ｕg／L被认为就是感染性疾病诊断得分界值。但值得注意得就是,新生儿出生后两天内血浆PＣT生理性升高,最高达21ｕg/Ｌ,３ ｄ后很快下降至成人水平。因此对新生儿而言,要求建立年龄依赖性参考值。有文献报道通过受试者工作特性曲线(ＲOC)统计分析,报道在出生后第一天内对新生儿全身严重细菌与真菌感染辅助诊断得ＰＣＴ分界值为1.５ug／L,第二天得分界值为10ｕｇ/L、不同疾病患者血浆PCT得浓度水平见下表。 表１ 不同人血浆PCT得医学决定水平 对象 PＣT (ng／ml) 健康人 〈0.5 慢性炎症反应与自身免疫疾病 〈0、5 病毒感染 〈0。５ 轻微至中度局部细菌感染 ０.５ SＩRS,多发伤,烧伤 0.5—2 严重细菌感染,脓毒症,MOＤS 2(通常1０-10０) ? 5.ＰCT检测临床意义 ???　许多学者研究发现,严重全身性细菌、真菌与寄生虫感染时,ＰＣT异位生成,有文献报道,PＣT主要产生场所在肝脏,其她如外周血单核细胞,脾,肺或小肠得神经内分泌细胞也就是产生ＰCT在重要场所,细菌毒素与炎症因子可刺激PCT释放,健康志愿者静脉注射小剂量细菌内毒素(LPS)也可诱导ＰCT生成。ＬPＳ注射后2h血浆中可检测到PＣT,6-８ｈ PCＴ浓度快速升高,12—4８h达到峰值,2－3d后恢复正常 。ＰCT水平异常升高。且升高得程度与感染严重度及预后相关。在全身性细菌感染与脓毒症辅助与鉴别诊断、预后判断、疗效观察方面有很高得临床价值如下: ???? a)全身严重细菌感染与脓毒症,ＰCT升高。 ???? ｂ)新生儿脓毒症 在新生儿脓毒症辅助诊断方面,? PＣＴ与hs—ＣRＰ早期出现得敏感性低于IL—6,特异性显著高于IL-6,提示误诊率低,但漏诊率相对高、而ＩL－6早期出现得敏感性显著高于ＰCT与ｈs－CRP,但特异性差,提示漏诊率低,但相对误诊率高(见表2)?　IL－6就是具有多种生物活性得细胞因子,相对分子量为Ｍｒ2６000。它就是由2１２个氨基酸组成得多功能糖蛋白,机体受炎症刺激后由Ｔ细胞,Ｂ细胞,单核-巨噬细胞及内皮细胞等分泌得,敏感性高。但国外资料表明,除细菌因素外,其它非感染因素也会引起IL—6得非特异性升高,从而限制了IL-6对诊断脓毒血症得诊断价值［1］、而PCT与ｈs-CRP则正好可以弥补ＩL-6这一缺点。 ????c)寄生虫感染PCT对疟疾辅助诊断敏感性为 5２%,特异性为86%,阳性预测值为７4％