AYLS7345 血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程30.docVIP

编写者:沈继录 审核者: 批准人:　 生效日期:20１2。1。１ 文件发放范围:微生物组 文件年度审核 审核者: 审核者: 审核者: 审核者: 日期: 日期: 日期: 日期: 血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 1.目得 规范血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程,确保检验结果准确可靠。 2、适用范围 血液及骨髓、 3.标本 3。1 标本类型 　血液及骨髓。 3。2　标本采集 ３.2、1 采血时间 　抗菌药物治疗前,发热初期或高峰时抽血。 3、２。2 采血频率 　对怀疑菌血症得成年病人,推荐同时在不同部位采集2～3套(每套包括一瓶需氧瓶、一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶),对感染性心内膜炎与真菌血症则应多次采集;婴幼儿病人,推荐同时在不同部位采集2套,可不做厌氧培养、 ３。2、3　采血量 以培养基得1/１０为宜,成人一次采血5~１0　ml,婴幼儿为1～２　m1。 3、2、4　骨髓标本　 用骨髓穿刺针从髂骨采集。 ３。3标本拒收标准 3　3.1血培养瓶破裂或有明显污染、 ３ ３　2 培养瓶标识与化验申请单不符。 ３.３ 3用过期得培养瓶采集标本、采血量不足等。 3.３。4 对于不合格标本,应及时通知采集人员重新留取标本。 3。4　标本保存　　采集标本后立即送到实验室,不能及时送检可置室温,切勿放冰箱。冬季血培养瓶在送检过程中应采取一定得保暖措施。 4.试剂、仪器 4。1　革兰染液、氧化酶试剂、3%过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等、 4。2 BAＣT/Alert 3Ｄ或ＢＡCTＥＣ 900０全自动血培养系统、ＶITＥK鉴定系统。成人需氧血培养瓶、厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性菌药敏卡((ＧNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPＩ)、革兰阳性菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等、 4、３ 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、Ｃ02培养箱等、 4。4　试剂得有效期与使用参照试剂说明书。 5、细菌鉴定与药敏质控 参见《质量管理程序》。 6。检验步骤 接收标本后,立即对标本进行编号、登记、门诊病人要同时登记住址,联系电话等病人信息。 6.1自动化培养　 将血培养瓶置全自动血培养仪中、当标本有菌生长时,仪器发出阳性报警,应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色,镜检,将结果向临床医师报告,同时转种血琼脂平板、麦康凯平板(或中国蓝平板)或加做巧克力平板,并进行直接药敏试验,置35℃、5%C02培养箱培养18~2４小时。从琼脂平板上挑取菌落进行涂片染色及触酶与氧化酶试验。革兰阳性菌与革兰阴性菌分别选用ＧPI及GNI上机进行细菌鉴定与药敏试验或者做Ｋ—B法药敏试验(具体操作见《药物敏感性标准操作规程》)。 6.2手工培养 6、2。1将血培养瓶置3５℃孵育箱,经1８～20小时孵育在血琼脂平板或巧克力平板上盲目转种一次。 6。２、2盲目转种后,培养瓶继续孵育至第5日,每日观察一次有无菌生长,并摇匀继续培养,下列几种情况提示有细菌生长(表５-2８)。 表5—28培养瓶中有细菌生长时得不同反应 根据肉眼观察,对有细菌生长迹象,取菌悬液涂片作革兰染色,同时分离培养,接种需氧血琼脂平板、麦康凯平板(或中国蓝平板)或加做巧克力平板,并进行直接药敏试验,置3５℃、５%CO2培养箱培养18～２4小时。次日纯培养再进行鉴定及药敏试验。 6 3特殊培养 ６.3　1布鲁菌属　 通常将血液接种到双相血培养瓶内,培养环境应为５％～１0%CＯ2,35℃,每48小时观察有无细菌生长,若无细菌生长应继续培养,阴性应培养至30日后才可发出报告。 6.3。２乏养菌 该细菌生长需要巯醇复合物与维生素Ｂ6。在血培养基中需加盐酸一磷酸吡多醛(0、0０1%)或L—半胱氨酸　(O。05%~O。1％)或两者皆有,否则乏养菌不能生长。血培养物转种血琼脂平板上,然后交叉划线接种金黄色葡萄球菌,靠近金黄色葡萄球菌有乏养菌生长。 6、3.3 Ｌ型细菌 在培养基中含有１0%蔗糖或甘露醇时,才适合Ｌ型细菌生长。 　　 　６.３。4　心内膜炎特殊致病菌 如果常规血培养72小时阴性而病人临床症状仍提示感染性心内膜炎,应提高培养基得营养或补加添加剂。有利于分离营养要求苛刻、生长缓慢得革兰阴性杆菌,如人心杆菌、侵蚀艾肯菌、金氏菌、伴放线杆菌、军团菌等细菌,应延长培养至2～４周,然后转种特殊得培养基。 、 6.3.5 结核分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。 7.操作流程 血液、骨髓 置血培养仪 需氧培养 厌氧培养 培养仪报警,调取培养物 耐氧试验 涂片、染色 细菌种类 转种平板3５℃培养1８－24h 直接药敏 一级报告 观察菌落特征及涂片、染色 二级报告 仪器或手工细菌鉴定及药敏试