香蕉的茎尖脱毒培养技术 龙周维 （广西职业技术学院农技系级应用 .docVIP

香蕉的茎尖脱毒培养技术 龙周维 （广西职业技术学院　农技系　2002级应用生物技术专业） 摘要：香蕉的茎尖培养在改良MS培养基中，附加BA2.0~5.0mg/l，试验结果显示，BA明显促进芽的形成和增殖，随着BA浓度的增高，形成的芽苗数也随着增多。低浓度的KT或BA有利于诱导生根。培养的瓶苗经检验为无病苗。 关键词：香蕉；茎尖培养；无病苗；快速繁殖。 引言：香蕉属单子叶纲、芭蕉群、芭蕉科、芭蕉属。香蕉是我国南方的重要果树之一，主要分布在广东、广西、福建、云南、贵州和台湾等省区。我区栽培面积约16万亩。目前生产上栽培品种产量低，品质欠佳，病害严重，在国内外市场缺乏竞争能力。香蕉用吸芽进行无性繁殖，繁殖系数低，吸芽还会促进病菌的扩展，导致植株严重丧失生产力。用茎尖离体培养繁殖可以克服这些问题。 1 离体快速繁殖技术： 1.1 吸芽的选择 吸芽是香蕉组织培养的主要材源。选择吸芽时应注意下列两点：（1）.吸芽应采自无病毒母本园或应选自田间长势旺盛的无病毒株。（2）.应在早春与秋季干旱季节采芽。梅雨季节和盛夏雨季因高温高湿，吸芽含杂菌较多，故不宜选取。 1.2吸芽的灭菌 从田间取回的吸芽，经自来水冲洗干净。去除枯叶和根，再用洗衣粉洗2次~3次。仔细剥去外层苞片，切去基部部分组织，保留具有顶芽和侧芽原基的小干茎（直径约为5cm~10cm），置超净工作台上，经紫外光灯灭菌30min~40min后，先用75%酒精浸泡30秒钟，再用0.1%升汞（含1‰吐温-80）溶液浸泡15min~20min其间常翻动，以便材料能充分灭菌。倒掉浸泡的水，最后用无菌水冲洗5~6次后便可接种。 1.3吸芽的接种和培养 接种时，将吸芽置于无菌大培养皿（或不锈钢小碟）上，用医用手术刀将吸芽切成若干小块，每块约为1.0cm×1.5cm×2.0cm,每块应具有1个~2个芽原基。用镊子将材料夹入琼脂培养基中，材料不能倒放。基部切口应插入培养基内。 可供作吸芽培养用，效果较好的培养基有：（1）MS培养基+5.0BA+1.0KT+2%~3%蔗糖；（2）MS 培养基+1.0~3.0BA+0.2~1.0NAA+2%~5%蔗糖；（3）MS无机盐+100肌醇+0.5盐酸硫胺素+0.5吡哆醇+2.0甘氨酸+5.0烟酸+5.0BA+0.1IBA+2%蔗糖；（4）MS培养基+10.0BA+15%椰子汁+2%~5%蔗糖。 在上述培养基中，促进香蕉分化和生长所用生长调节剂以细胞分裂素（2.0~5.0BA）为主，生长素只需少加或不加。培养物置于25oC~28oC培养室内培养。培养早期可不照光，待芽萌动后每天光照（2000lx~3000lx）10h~12h。待长出一定数量的丛生苗（约经40d~60d）便可供作切取茎尖之用。 1.4茎尖的切取和培养 从培养的丛生芽中选取一些粗壮的，基部膨大（已形成基盘）的无根苗（长约3cm~5cm）。如带有琼脂，应在无菌水中洗涤干净，再用无菌吸水纸将表面水分吸干。在超净工作台上借助体视显微镜放大观察。用镊子将小叶片剥除，直至生长点充分暴露，然后用锐利的具柄刀片切取大小约0.5mm~1.5mm，带有1个~2个叶原基的茎尖，经无菌水洗净后，接种至液体培养基内进行振荡培养。待茎尖长至3mm~5mm大小时便可转移至琼脂培养基上，切勿倒置或斜放。可供香蕉茎尖培养，效果较好的培养基为改良的MS培养基。由MS无机盐、附加0.5盐酸硫胺素、2.0~5.0的BA和2%~5%蔗糖组成。置于25oC~28oC培养室内培养，每天光照（1000lx~2000lx）10h~12h。为了节省时间和操作环节，只要母株经鉴定确实不带病毒，可省去茎尖培养环节。 1.5继代培养 分化培养基为MS+0.2NAA+2.0BA；MS+1.0NAA+2.0BA；MS+5.0NAA+1.0BA（浓度单位：mg/l），加3%蔗糖，培养温度为27oC，光照强度为1000lx左右，每日光照10h，固体培养。 茎尖培养在MS+0.2NAA+2.0BA上，约经3~4周形成小苗，在小苗的基部周围逐渐长出基盘，基盘直径约2.5cm。基盘上呈轮轮圆圈线条，在线条附近分化出突起的小白球，当将基盘与小白球一起切下，移至上述新鲜培养基上，小白球会发育成无根小苗。将无根小苗移植于MS+1.0NAA+2.0BA培养基上时，经7天后叶片展开，经3~4周后，在小苗的基部分化出4~5个芽。如果将一芽锥切成4块，然后培养在MS+5.0NAA+1.0BA或MS+1.0NAA+2.0BA培养基上时，约经4~6周，残缺的芽锥会分化发育成完整小苗。此时应取样进行血清学检查有无病毒，以便及早清除病毒苗。 在继代繁殖中，为减弱顶端优势，促进基盘腋芽生长，转移培养时可用无菌手术剪刀将主茎上部大部分假茎叶剪去，待无菌小苗基部长出若干幼芽时，再转至新鲜培养基上培