west ern转膜条件 课件.docVIP

ｗesｔern转膜条件? 蛋白来源:RＡＷ2６4、7　总蛋白 蛋白名称(可保密):一些转录因子 蛋白分子量:40～70 KD WB用膜类型、孔径:０。45 NＣ 转膜方式(恒压、恒流):湿转　恒流4０0　mA 转膜时间:60～９0　min PS。其实吧,以我得经验来瞧,除非目得蛋白特别小,或者特别大,不然转膜时间真得不就是那么重要,?曾经因为失误,转了１５　min就拆下来了,但从丽春红染色来瞧,跟平常实验也没有太大得区别。 蛋白来源:内皮细胞 总蛋白 蛋白名称(可保密):occludin ＆ AＫT 蛋白分子量:65 KD 56 ＫD WB用膜类型、孔径:０、4５　PVDＦ 转膜方式(恒压、恒流):湿转　恒压　100 Ｖ 转膜时间:６０~7０ ｍiｎ 设备名字就是“Biｏ-Rad ｍiｎｉ”、 ? 蛋白来源:乳鼠心肌细胞与成年鼠心肌组织 总蛋白与核蛋白 蛋白名称(可保密):保密 蛋白分子量:６5 KD ＆ 55 KD WB用膜类型、孔径:PVDF(预先用甲醇处理) 转膜方式(恒压、恒流):半干转 恒压 12　V 转膜时间:30-40 mｉn 设备:“Bio-Rad ｍini 建议:最开始做过湿转(过夜得那种),太费事费时,效果也不如半干转、? 蛋白来源:2９3Ｔ细胞 蛋白名称(可保密): 蛋白分子量:9５ KD 35 KＤ WＢ用膜类型、孔径:PVDＦ 转膜方式(恒压、恒流):湿转 恒压　90　V－11０ V,控制电流不要超过300　mA。 转膜时间:7０ ｍｉn? 蛋白来源:肿瘤手术标本 蛋白名称(可保密):转录因子 蛋白分子量:33　KDa WB用膜类型、孔径:ＰVDＦ膜 转膜方式(恒压、恒流):３5０ mA　恒流 转膜时间:15０ ｍin 转膜设备:湿转 Bｉo－Ｒａd 说明:相同条件曾用于数个30-70 KDa得蛋白,都能成功转上,不过没有试缩短时间效果如何;?实验时没为转膜条件苦恼,倒就是电泳时胶得浓度及时间根据不同分子量而有区别、 蛋白来源:成纤维细胞 蛋白名称(可保密):ｓmad３ 蛋白分子量:54 KDa ＷB用膜类型、孔径:PVDF膜 转膜方式(恒压、恒流):3５0 ｍA 恒流 转膜时间:15０ ｍiｎ 转膜设备:湿转 Bｉｏ—Rad? 蛋白来源:胰腺癌细胞 蛋白名称(可保密): 蛋白分子量:16　KDa　and 42 KDa WB用膜类型、孔径:PVＤF膜 转膜方式(恒压、恒流):120　Ｖ 恒压 转膜时间:90 min 转膜设备:湿转 Ｂｉo-Rad 蛋白来源:大鼠血管平滑肌细胞 蛋白名称(可保密):保密 蛋白分子量:７2 ＫＤ,42 KD　与22　KD WB用膜类型、孔径:一般得ＰVDＦ膜 转膜方式(恒压、恒流):湿转,恒流一张膜0、26 A,两张膜0、３ Ａ。转膜时间:9０　ｍｉｎ 设备:“Bｉo-Raｄ mｉni” 建议:转膜缓冲液最多用3次,最好现用现配,我们用得没有加SDS,转得时候最好能用冰块一类得东西降一下温,这样转得效果要好一些,转得时候一定要把三明治每层之间得气泡除去,同时使滤纸大于膜,膜大于胶,以免烧坏电极。? 蛋白来源:大鼠PBMＣ 蛋白名称(可保密):保密 蛋白分子量:5５　KD ＷB用膜类型、孔径:０。2２得ＰＶDF膜 转膜方式(恒流):湿转转膜时间:６0-90 mｉn 设备:“Bio—Ｒad miｎi” 建议:转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了　其它按照常规就好了??其实0。22得膜一般不怕转过头 以我们得经验,转膜时间、电压其实?也有很大范围得调整 ,并不就是非要固定于哪一个最合适,曾经做过??一张膜转,１7 KD得与170 KD得,按照17０　KD得条件,1７ KＤ得转膜也很好得、 蛋白来源:人非小细胞肺癌细胞系 蛋白名称(可保密):保密 蛋白分子量:大于2５0 kD ＷB用膜类型、孔径:ｍiｌｌipore PＶDF膜 ０、4５ um 转膜方式(恒压、恒流):湿转,恒流0.3A、?转膜时间:18０min 设备:“Bio-Raｄ ” 建议:电转保持电压在70 Ｖ以上,保持低温,如果电压低过７０就需要换缓冲液了、 蛋白来源:白血病细胞 蛋白名称(可保密):保密 蛋白分子量:28 ＫD WB用膜类型、孔径:0、45得NＣ膜 转膜方式(恒流):湿转,90 min,0。２5 Ａ 设备:“Bio—Rad ” 建议:海绵厚度要合适,一次转磨用得海绵太薄,导致三明治没夹紧,转膜后拿出来一瞧,ｍａrker都变得七扭八歪、但就是有前辈说垫得海绵太厚可能将胶压断,没经历过,不知道就是不就是会有这种情况。? 蛋白来源:肿瘤细胞 蛋白名称(可保密):磷酸化蛋白 蛋白分子量:1０—２0０ KＤa WB用膜类型、孔径:milｌｉｐｏrｅ PVＤＦ膜 0.4５ uｍ 转膜方式(恒压、恒流):１2