细胞悬液内毒素限度检测法.docVIP

细胞悬液内毒素限度检测法 摘要 本实验采用PYROTELL 单一试验小瓶法，在设立阳性、阴性、阳性干扰、及空白对照的情况下，对三份回输细胞悬液进行了内毒素含量测定。结果表明，三份样品内毒素含量均小于0.25EU/ml，且实验方法可靠、简便。 关键词 内毒素检测 对照 前言 PYROTELL 单一试验小瓶法利用已标定好的鲎试剂，在所测样品内毒素含量高于标定值时即会产生凝集反应，而在低于标定值时即不会有阳性反应，由此来判断所测样品内毒素水平是否达到或超过预定值。 实验材料 The Limulus amebocyte lysate SINGLE TEST VIAL ( 0.25EU/vial) （批号：506-433） CSE（控制标准内毒素） 规格：10ng/vial 批号：249012 无热源水 批号：CA-12-05 试管架，用于内毒素检测管放置及水浴 水浴（37度并保持半小时以上，提前一小时开机） 无热原200微升及1毫升TIP 200微升及1000微升移液器 10ml注射器 15毫升离心管 15毫升离心管架 10毫升移液管 电动加样器 止血钳，用于胶塞的拔除 蜗旋振荡器 一次性无菌手套（无粉） 实验方法 阳性对照 一管 0.5EU/ml，将标准品用10ml 无热原水溶解后，得到10EU/ml 储备液。用时取100微升储备液溶于1.9毫升无热原水中。 阴性对照 一管 含1%人血白蛋白的生理盐水0.2ml。 阳性干扰对照 一管 用于排除细胞悬液中某些成份对凝集过程的影响。为内毒素含量为0.5EU/ml的细胞悬液。 空白对照 一管 无热原水。 样品 0.2ml 细胞悬液。 实验步骤 制备样品及对照，依照空白，阴性，样品及阳性对照的次序依次制备 轻轻弹击各检测管，使其中的LAL掉落于试管底部。 去除封口，用止血钳垂直拔除胶塞，注意不要碰及试管口 在各试管中加入对照及样品，次序与制备时相同。 将每管在蜗旋振荡器上依次振荡2秒，使LAL与液体完全混匀。注意不要碰及管口。 将各管垂直放置于试管架上，放入37℃水浴，使试管中所有液体浸入水浴但不触及水浴槽底部及侧壁，保温60±2分钟 将试管从管架垂直提起，以流畅动作一次性将试管倒置180度，观察凝胶形成情况。 实验结果 结果判断 如当试管翻转180°时凝胶仍保持完整的为阳性反应，所测内毒素大于0.25EU/ml。 如无凝胶形成或形成一团粘性物质，但试管翻转后不能保持完整的为阴性反应，所测内毒素小于0.25EU/ml。 结果判断时需要对照呈如下情况下方为有效： 阳性对照 阳性 阳性干扰对照 阳性 阴性对照及空白对照 阴性 阳性对照 阳性（见图 1） 阴性对照 阴性 空白对照 阴性 阳性干扰对照 阳性 张岩生样品H3 阴性 肖建飞样品H6 阴性 图1 阳性对照图片 结论 经过各种对照及相应样品的检测，表明该方法适用于日前我实验室对于细胞悬液中内毒素的检测，实验方法简单，结果易判断，所得结果迅速。所设标准符合SFDA对大容量输液内毒素的要求。 该方法要求在每次更换检测样品中的成份时都需重新进行对照，如生理盐水、人血白蛋白、相应检测试剂和无热源水。但经一次对照后，如无上述材料的改变，每次检测时只需在待测管中加入0.2ml细胞悬液后即可检测。 批注： 我实验室现储人血白蛋白： 华兰生物工程 批号：200704032 4瓶 Baxter 批号：LA07D176AA 2瓶