分子医学技能：流式细胞仪（FLOW CYTOMETER，FCM）.pptVIP

流式细胞仪（FLOW CYTOMETER，FCM） 对于处在流动状态的细胞或生物颗粒进行多参数的快速的定量和分析的技术。 检测仪器：流 式 细 胞 记 数 仪 　　 激光技术 电子物理技术 光电测量技术 计算机技术 细胞荧光化学技术 单克隆抗体技术 FCM 是诸多技术的结晶: FCM结构组成部分 液流系统; 将细胞引导至检测位点 光学系统; 产生并收集光学信号 电子系统; 将光信号转换成电信号,使之数字化,输入计算机并分析。 细胞分选系统。 FLOW CELL(流动室) Injector Tip 荧光信号 聚焦的激光光束 鞘液 荧光信号 每种荧光染料均有特定的激发波长, 并激发后会有发射波长,流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长. 利用各种不同波长的光学滤片来收集(检测)这些光学信号 荧光染料的特性 激发波长(EXCITING) 发射波长(EMISSION) 激发光源与荧光标记物 FALS Sensor Laser 前向角散射光信号 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 侧向角散射光信号 Fluorescence FALS Sensor Fluorescence detector ( FL1,FL2,FL3,FL4) 检测信号 电子系统 当细胞携带荧光素标记物, 通过激光照射区时, 受激激发, 产生代表细胞内不同物质、不同波长的荧光信号, 这些信号经A/D转换成数字信号, 送计算机进行储存、 作图、 统计分析 检测器 Photomultiplier tube (PMT) 将光学信号转变为电脉冲(数字数据)信号 双参数点图 1. FSC,与细胞直径平分正相关 ?2. SSC, 指与激光束正交90度方向的散射信号，它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感，可以提供细胞内结构及颗粒性质的信息 结 果 示 范 1.56 0.25 8.23 0.26 左图显示在抗原刺激前，CD4+和CD4-细胞中能产生IFN-γ的细胞占PBMC的0.25%和1.56% 右图显示在抗原刺激后，CD4-细胞中能产生IFN-γ的增加到8.23%，提示该抗原能促进CD4-细胞分泌IFN-γ