制备加压色谱课件.pptVIP

一Sakuma和Motomura(1987)报道经过分析型高压液相色谱初步分析后，用大规模制备型色谱从伞形科植物红柴胡(Bu-pleurum危lcatum)中分得皂苷成分Saikosaponins a，c和d。采用100×11em轴向压缩装有5kg YMC 20 tLm RP一18硅胶的色谱柱，流动相为分级乙腈一水梯度溶剂系统(27：73，30：70：35：65)，流速为210ml／min。lOg粗皂苷混合物经进样分离后得到1210 nag saikosaponin a，403mg seikosaponin c和1604mg saikos．aponin do 制造生产规模液相色谱系统的公司包括：Amieon公司(K—Prime 3000)、YMC公司(PLC—IOOA)、Separations Teehnolo~公司(Process 2000；10～20cm直径的色谱柱)、Varex公司(PSLC一150，PSLC一300；15cm和30cm直径的色谱柱)、Prochrom公司(例如，Proehrom 150，15cm内径轴向压缩柱)和E．Merck公司(Prepbar 100和200分离系统，可适用于5～20em内径的色谱柱，流速可达1600ml／min)。 介于生产规模与小型实验室规模的色谱设备有SeparationsTechnology公司的Lab 800A，该装置采用一不锈钢色谱柱，在120 bar的压力下，流速可达800ml／min。另一种小规模生产型液相色谱装置是Varex公司的PSLC一100，该装置也可采用装有高效微小颗粒固定相的色谱柱。Merck公司的NovaPrep 5000系统可在压力为340 bar，流速高达1000ml／min的条件下运转；该公司生产25em×4mm至60em×20em之间的多种型号色谱柱。 Waters公司的Prep LC 500型色谱仪已被Prep LC 2000型色谱仪所取代。后一系统在最大压力为140 bar(2000 psi)的条件下，可提供的流速范围在4～300ml／min之间，且可采用径向压缩色谱柱及钢柱。Waters公司的另一系统，Delta Prep 4000，兼可进行分析和制备型分离，分离的样品量可从微克至毫克数量级。在同一系统中也可使用高压液相色谱梯度洗脱法，进行分离及检测流分的纯度。在O．5～150ml／min的整个流速范围内，该系统可承受300 bar(4000 psi)的压力。De Bellis等(1995)报道用Delta Prep 4000系统从紫杉(Taxus×Media)的针叶中分得7一砸一cephalomannine。他们对针叶的80％甲醇提取物进行初步分离得到一2g的流分。将该流分溶于40ml甲醇中，利用Waters Prep—Pak Bondapak C18色谱柱(15 tan，300×47ram)进行制备型高压液相色谱分离(分成20批进样，每批2m1)，乙腈一水(25：75)洗脱，流速为80ml／min(检测波长为227眦)o合并含有7一epi—cephalomannine的流分，浓缩，并以乙酸乙酯提取，最终得到60mg所需产物。 Biotage公司(Charlottesville，VA，USA)也生产一系列径向压缩柱，这些柱可与Kiloprep 250压缩系统和Kiloprep 250泵系统连接使用。这类色谱柱有两种规格：300×100mm或600×lOOmm(最大压力为2000 psi／150 bar)。 Pharmacia公司生产可用于生产规模分离及常规制备型色谱的快流速硅胶及一种单分散性多聚体(Mono—Beads)(见第八章)。其他一些公司，如Whatman公司和Rainin公司也开始有生产性液相色谱方面的产品，其侧重点主要在蛋白质的纯化、发酵产物的分离和单克隆抗体的最后液相色谱纯化等领域，这些领域目前发展很快。 科学研究的驱动力主要在于发表研究结果，而色谱分离的工业应用经常处于保密状态，在杂志上很少能看到，这使得对生产性分离进行总体评价十分困难。Jones(1988b)介绍了这类色谱的应用与成本。 5．3超临界流体色谱(SFC) 有关超临界流体色谱的历史和原理曾有过许多综述报道(例见C-ere，1983；White和Houck，1986；Bevan和Marshall，1994；Perrut，1994)。 与分析型超临界流体色谱相比，人们较少关注制备型超临界流体色谱技术。然而该方法具有如下优点，值得进一步开发： ——它比HPLC速度更快； ——它比HPLC更容易除去分离产物中的溶剂； ——它具有取代正相HPLC的潜力。当与超临界流体提取方法配合使用时，提取、浓缩及色谱分离可一次性