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。 第三章 愈伤组织的诱导与培养 第一节 愈伤组织的诱导与继代培养 愈伤组织 （callus ）: 在培养基上， 由外植体经脱分化和细胞分裂形 成的一团无序生长的薄壁细胞。 大部分外植体细胞须经脱分化形成愈伤，才能再分化成完整植 株，只有茎尖等少数细胞只恢复为分生状态但不分裂，直接再分化。 愈伤组织的诱导与分化是植物组培的基本环节。 一、愈伤组织的诱导及其形态特征 1、愈伤组织的诱导 1）起动期 / 诱导期（ initiation/induction stage, Induction of growth ） 外植体细胞在外源激素作用下， 经脱分化而恢复分裂状态， 开始形成 愈伤。细胞外观无明显变化，代谢旺盛，合成加强，为分裂做准备。 持续十几小时 ~几天。 2）分裂期（ divition stage/phase ）： 外植体切口边缘膨大，外层细胞迅速分裂，体积变小，具分生细胞的 特征，细胞数速增。 3）形成期（ formation stage/Differentiation phase ）： 外植体表层细胞分裂减缓， 内部细胞开始分裂， 大量细胞形成瘤 状/ 泡状或片状结构。若不及时继代，将分化出拟分生组织瘤状物和 维管组织，又称分化期。 2. 愈伤组织的形态特征 精选资料，欢迎下载 。 质地： 松脆易碎的颗粒状；紧密坚实的结块状；水渍或浆糊状。 颜色： 白色或淡黄色；淡绿色或绿色；黄色至褐色。 一般，淡黄或淡绿 / 绿色松脆（近圆形）或致密的颗粒状愈伤再生能 力较强，白色 / 灰白色或黄褐色、浆糊状或紧实（香蕉形）的愈伤再 生能力差。 3. 影响愈伤诱导的关键因素 愈伤的形成是 外植体 、培养基 和培养条件 诸因素互作的结果。迄今， 几乎从各种外植体诱导形成愈伤。 其关键主要不在于外植体， 而是培 养基，尤其是激素的种类和浓度。 生长素为愈伤诱导和增殖所必需，细胞分裂素视外植体来源而异。 二、愈伤组织的继代培养 继代培养（ subculture ）：将原有培养物转移到新鲜培养基上继续培 养的过程称为 ~。 愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养枯竭，水分散失，代 谢物积累，致使其生长缓慢甚至停止，须进行继代培养。 方法： 一般每 3~4 周继代 1 次；每次取 生长迅速、浅色、疏松的愈伤 进行； 继代用培养基 与原来相同 ，或根据培养目标、培养阶段不同而 改变成分，通常是改变激素配比。 注： 通过调节培养基成分， 特别是生长调节剂种类和比例， 可使不同 类型愈伤在一定程度上相互转变。 精选资料，欢迎下载 。 提高生长调节剂浓度 紧实 松脆 减少或除去生长调节剂 继代培养的目的： 获得大量优良愈伤，供进一步研究之用。 优良愈伤的特点： 1）疏松易碎和旺盛的增殖能力，以便建立悬浮系或无性系； 2）经长期继代仍保持较强的再分化能力，便于获得再生植株或进行 遗传操作。 三、悬浮培养 悬浮培养（ suspension culture ）：将疏松易碎、生长旺盛的愈伤小 块放入液体培养基中进行振荡培养， 以形成分散性好的游离单细胞和 小细胞团的培养技术。 小型培养用 100~250ml 三角瓶；大规模培养用特制的培养容器进行。 1. 悬浮培养的用途 1）提供一个相对一致的细胞群体，供生理生化、胚胎发生、基因表 达等研究。 2）次生代谢物质生产。 3）细胞突变体的诱变与筛选。 4 ）分离原生质体。 理想的悬浮系： 应由大量增殖迅速的游离细胞组成， 但一般