第六章--工业微生物产生菌的分离筛选.pptVIP

第六章 工业微生物产生菌的分离筛选; 菌株分离：就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。 ;工业微生物产生菌的筛选包括两部分： （1）从自然界分离 （2）野生菌株进一步纯化并进行代谢产物的鉴定;收集和筛选的途径： （1）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。 （2）由自然界采集样品，从中进行分离筛选。 （3）从一些发酵制品中分离目的菌株 。;1. 国内重要菌种保藏机构;2. 国外重要菌种保藏机构;白霉奶酪 法国蓝纹绵羊奶酪; 菌种的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、产物鉴别这几个步骤。 ;分离的目的;第一节 含微生物样品的采集;一、土壤中采样 土壤是人类最丰富的菌种资源库。 一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）放线菌（107）霉菌（106）酵母菌（105）藻类（104）原生动物（103）， ;（一）根据土壤特点;3．地理条件 南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的土壤。 4．季节条件 夏季到秋季，约有7～10个月处在较高的温度和丰富的植被下，土壤中微生物数量比任何时候都多，因此，秋季采土样最为理想。 ;（二）采样方法;二．根据微生物生理特点采样;２. 根据微生物的生理特性;三、特殊环境下采样; 得克萨斯州中南部的一个岩洞中存在着大量嗜碱性的，能进行氨氧化和产几丁质酶的微生物，其原因是这里生活这2000万只蝙蝠，其排泄物造成了洞内10m深的丰富营养层，这种特殊的环境对该种微生物起了选择和富集的作用。 ; 从考拉(Koala)熊肠中也曾分离到萜烯分解酶的产生菌 ;2．极端环境条件的影响; 海洋是新抗生素的重要来源。许多海洋生物体内都含有微生物，这些微生物为宿主抵御病害起着关键作用。因此，从鱼组织和虾消化道里分离筛选抗癌药物和抗炎症药物是一个有效地途径。 ;第二节 含微生物样品的富集培养;一、控制培养基的营养成分;连续富集培养;二、控制培养条件; 三、抑制不需要的菌类;第三节 微生物的分离;一、好气微生物的分离;（一） 稀释涂布法;;（二）划线分离法;;（三）利用平皿的生化反应进行分离 1、透明圈法 混浊底物被分解后形成透明圈。如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶、有机酸等。 ;2、变色圈法：直接用显色剂或指示剂;果胶酶：刚果红（绛红色水解圈） 谷氨酸：溴百里酚兰（pH 6.2以下为黄色， pH 7.6以上为蓝色） 内肽酶：吲羟乙酸酯被产酶菌落水解为3-羟基吲哚，后者氧化成蓝色物质） 乙醇：蓝色的盐类物质在醇脱氢酶和NAD作用下反应产生电子脱色，形成淡白色晕圈。;3、生长圈法;4. 抑菌圈法;（四）组织分离 1. 对一般有病组织的分离方法 清洗组织表面—→0.1％升汞表面消毒—→无菌水冲洗—→适宜温度培养—→挑取菌落;2. 食用菌孢子分离方法 （1）组织块分离法：组织块切小块，斜面直接培养。 （2）多孢子分离：表面消毒，孢子采集。 （3）单孢子分离：收集到的孢子稀释涂布培养。; ;（五）单细胞或单孢子分离法;2. 小滴分离纯化培养法;（六）特殊菌类——环保降解菌的分离;加拿大16岁的高中生丹尼尔·伯德;二、通过控制营养和培养条件进行分离 1、营养成分 各种微生物对碳源、氮源的需求不同。 分离放线菌，使用HV（腐殖酸维生素）琼脂培养基、土豆-胡萝卜水汁液培养基和淀粉琼脂培养基。 筛选水解酶产生菌时，通常利用以底物为惟一碳、氮源的平板进行分离。 ;2、pH;3、排除不需要的菌类 细菌：加制霉菌素 放线菌：加SDS；氟哌酸 + 制霉菌素 + 青霉素 霉菌和酵母：青霉素、链霉素、四环素 根霉和毛霉：加去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延 4、控制温度 高温微生物（50~60℃ ）； 中温微生物（20~40℃ ） ； 低温微生物（15℃ 或更低）;三、厌气菌的分离 （一）加还原剂： 分离培养基内加入还原剂，如半胱氨酸、D型维生素C、硫化钠等。培养皿于置于事先已抽真空密闭的容器内（充CO2或N2也可）培养。 ;（二）焦性没食子酸法;（三）平皿厌气培养法;（四）试管厌气培养法;（五）玻璃板隔绝空气培养法;（六）生物吸氧法;第四节 野生菌株的筛选和目的产物的鉴别; 1. 平板筛选;2. 摇瓶发酵筛选;二、复筛;第六章 思考题